ICS07.100.30 B 20 DB22 备案号：41841-2014 吉 林省地方标准 DB 22/T 2053—2014 饲料中构巢曲霉测定实时荧光PCR方法 Determination of Aspergillus nidulans in feedstuffs Real-time PCR method 2014-02-28发布 2014-04-30实施 吉林省质量技术监督局 发布   DB22/T 2053—2014 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。 本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。 本标准主要起草单位：吉林省产品质量监督检验院、国家农业深加工产品质量监督检验中心、中华 人民共和国吉林出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：史艳宇、刘金华、王莹、郎乐、张庆波、韩冰雪、李媛媛、王庆峰。 I   DB22/T 2053—2014 饲料中构巢曲霉测定实时荧光PCR方法 1 范围 本标准规定了饲料中构巢曲霉的实时荧光PCR检验方法。 本标准适用于饲料中构巢曲霉的快速筛选检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 13092 饲料中霉菌总数的测定 GB/T 27403 实验室质量控制规范食品分子生物学检测 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 实时荧光PCRreal-time fluorescent PCR 实时荧光聚合酶链式反应。 3.2 Ct值cycle threshold value 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 4 原理 对样品的培养物进行DNA提取，通过实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅曲线，从而对饲 料中的构巢曲霉进行快速检测。 5 试剂 除特别说明以外，所有试剂均为分析纯，水为按照GB/T 6682规定的一级水。所有试剂均用无DNA 酶污染的容器分装。 5.1 引物及探针： a)上游引物：5’-GGCTACACCGAGGACGACAT-3’ b)下游引物：5’-CCCGCCTTAGCATCGAAGA-3’ 1