ICS65.120 B 46 DB22 备案号：41837-2014 吉 林省地方标准 DB 22/T 2049—2014 动物源性饲料中鸭源性成分测定 PCR方法 Determination of duck derived materials in animal-originated feedstuffs PCR method 2014-02-28发布 2014-04-30实施 吉林省质量技术监督局 发布   DB22/T 2049—2014 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。 本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。 本标准主要起草单位：吉林省产品质量监督检验院、国家农业深加工产品质量监督检验中心、中华 人民共和国吉林出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：史艳宇、刘金华、邴炜、王莹、周亮、吕航、郎乐、张庆波、宫国强。 I   DB22/T 2049—2014 动物源性饲料中鸭源性成分测定 PCR方法 1 范围 本标准规定了动物源性饲料中鸭源性成分的PCR检测方法，该方法的检出限为0.1%。 本标准适用于动物源性饲料中鸭源性成分的定性检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27403 实验室质量控制规范食品分子生物学检测 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 鸭源性成分duck-derived materials 鸭种属特异性 DNA片段。 4 原理 对样品进行 DNA提取，通过PCR扩增，检测鸭特异性基因片段。 5 试剂和材料 除特别说明以外，所有试剂均为分析纯，水为按照GB/T 6682规定的一级水。所有试剂均用无DNA 酶污染的容器分装。 5.1 鸭源性成分检测用引物（对）序列为： a) b) 上游引物：5’- CATCTATCCTGCTAGCCGCC -3’ 下游引物：5’- GGCTTGAGTGGAAGAATGCC -3’ 5.2Taq DNA聚合酶。 5.3 dNTP：dATP（deoxyadenosine triphosphate，脱氧腺苷三磷酸）、dGTP（deoxyguanosina triphosphate， 脱氧鸟苷三磷酸）、dCTP（deoxycytidinetriphosphate，脱氧胞苷三磷酸）、dTTP（deoxythymidine triphosphate，脱氧胸苷三磷酸）。 5.4 动物基因组 DNA提取纯化试剂盒。 5.5 RNase A酶：冻干品，不含DNase。 5.6 蛋白酶 K：冻干品。 5.7 三羟甲基氨基甲烷（Tris）。 5.8 Tris饱和苯酚。 1