中华人民共和国国家标准GB5009.261—2016食品安全国家标准贝类中神经性贝类毒素的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.261—2016前言本标准代替SN/T1573—2013《出口贝类中神经性贝类毒素检验方法 小鼠生物法》本标准与SN/T1573—2013相比,主要变化如下 :———标准名称修改为 “食品安全国家标准 贝类中神经性贝类毒素的测定 ”ⅠGB5009.261—2016食品安全国家标准贝类中神经性贝类毒素的测定范围12本标准规定了贝类中神经性贝类毒素(NSP)检测的小鼠生物测定方法 本标准适用于贝类及制品中神经性贝类毒素(NSP)的检测原理用乙醚提取贝类中神经性贝类毒素 ,提取物经减压蒸干后 ,再以1%吐温-60生理盐水为分散介质,制备NSP-1%吐温-60生理盐水混悬液 ,将该混悬液注射入腹腔 ,观察小鼠存活情况 ,计算其毒力试剂和材料3除非另有说明 ,本方法所用试剂均为分析纯 ,水为GBT6682/ 规定的一级水试剂3.1盐酸(HCl)3.1.13.1.2无水乙醚()CH O4 10吐温 (3.1.3 -60CH O64 12626)氯化钠(NaCl)3.1.43.1.5次氯酸钠(NaClO)试剂配制3.23.2.1氯化钠溶液(0.85%):称取0.85gNaCl,加水溶解并定容至100mL3.2.2 1%吐温-60:称取1.0g吐温-60,用0.85%氯化钠溶液溶解并定容至 100mL3.2.3次氯酸钠溶液(5%):称取次氯酸钠50g,用水溶解,并稀释至1000mL标准品3.3短裸甲藻毒素标准品 (brevetoxin-2),纯度≥90%材料3.4小白鼠:体重为19g~21g的健康ICR品系雄性小鼠仪器和设备4旋转蒸发器均质器4.14.21GB5009.261—2016天平:感量为0.1g分液漏斗4.34.44.54.64.74.84.9圆底烧瓶布氏漏斗一次性注射器 :1mL离心机:转速≥6000rmin/金属筛网:孔径约2mm分析步骤5注:橡胶手套玻璃制品等用过的器材,以及废弃的提取液应在次氯酸钠溶液(5%)中浸泡1h以上,以使毒素分解 试样制备5.1样品采集5.1.1每个分析样品至少要取 10个以上贝类,并使贝肉达200g以上冷冻样品置于保温盒中冷冻送检,或保证其处于低温状态(0℃~10℃)送检如为带壳样品,应开壳去除水分后冷冻送检 试样制备5.1.2生鲜带壳样品5.1.2.1用清水将贝壳外表彻底洗净 ,切断闭壳肌,开壳,用水淋洗内部去除泥沙及其他外来物 将闭壳肌和连接在胶合部的组织分开 ,取出贝肉,切勿割破肉体 开壳前不要加热或用麻醉剂收集200g放在孔径约2mm的金属筛网上沥水5min,捡出碎壳等杂物 ,将贝肉均质,备用贝肉冷冻样品5.1.2.2在室温下,使冷冻样品呈半冷冻状态 带壳冷冻样品 ,按5.1.2.1方法清洗开壳淋洗取肉,除去贝肉外部附着的冰片,抹去水分后,室温缓化收集200g贝肉放在孔径约2mm的金属筛网上沥水 5min,将贝肉均质,备用贝类罐头5.1.2.3将罐头内容物沥干水分 ,倒入均质器充分均质 ,备用贝肉干制品5.1.2.45.1.2.5称取100g干制品放入足量清水中浸泡(24h~48h4℃冷藏),沥干均质备用盐渍品用清水洗涤,流水脱盐,沥干,均质备用试样提取5.2取100g试样到500mL烧杯中,加入5g氯化钠和1mL浓盐酸搅拌均匀边搅拌边加热混合物至沸腾,文火煮5min,冷却至室温将混合物移至500mL离心管中,用50mL乙醚冲洗烧杯,将冲洗液一同移到离心管中 向离心管2GB5009.261—20166000rmin离心15min