中华人民共和国国家标准GB5009.274—2016食品安全国家标准水产品中西加毒素的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.274—2016前言本标准代替 SN/T3038—2011《出口海产品中西加毒素的检测小鼠生物法》和SN/T3869—2014《出口水产品中雪卡毒素的测定 》本标准与SN/T3038—2011和SN/T3869—2014相比,主要变化如下:———标准名称修改为 “食品安全国家标准水产品中西加毒素的测定”;———保留小鼠生物法为第一法 ,增加液相色谱-串联质谱法为第二法 ⅠGB5009.274—2016食品安全国家标准水产品中西加毒素的测定范围1本标准规定了水产品中西加毒素的测定方法本标准适用于水产品可食部分中西加毒素的测定第一法小鼠生物法原理2用丙酮提取水产品中西加毒素 ,提取物经减压蒸干后 ,再以1%吐温-60生理盐水为分散介质,制备西加毒素-1%吐温-60生理盐水混悬液 ,将该混悬液注射入小鼠腹腔 ,观察小鼠存活情况 ,根据西加毒素致小鼠死亡时间和鼠单位的关系表查出对应的鼠单位,并按小鼠体重校正鼠单位 ,计算确定西加毒素含量(鼠单位毒力)试剂和材料3除非另有说明 ,所用试剂均为分析纯 ,水为GBT6682/ 规定的一级水试剂3.1吐温(3.1.1 60CHO64 12626)3.1.2苦味酸[HO-CHNO()]6 22 3丙酮()CHCOCH3 33.1.33.1.43.1.53.1.63.1.73.1.83.1.93.1.10甲醇(CHOH)3正己烷( )CH6 14乙醇(CHCHOH)32乙醚(CHOCH)33氯仿(CHCl3)次氯酸钠(NaClO)生理盐水试剂配制3.23.2.13.2.23.2.350g 9950mL水溶解,搅拌使次氯酸钠充分溶解次氯酸钠溶液(5%):称取次氯酸钠 ,用甲醇溶液(90%):量取100mL甲醇,加入900mL水,混匀乙醇溶液(25%):量取250mL甲醇,加入750mL水,混匀3.2.4氯仿-甲醇溶液(3+97):将氯仿与甲醇按体积比为3∶97混合均匀3.2.5 1%吐温60-生理盐水:用生理盐水将吐温 60稀释为吐温60含量为1%的溶液1GB5009.274—2016标准品3.33.4太平洋西加毒素( ):纯度≥90%-1P-CTX-1CH O60 8819,材料小鼠:昆明系封闭群清洁级 (CL)或无特定病原菌级 (SPF),且体重为18g~22g的健康雄性小鼠 仪器和设备44.1电子天平:感量为0.001g均质器4.24.34.44.5恒温水浴箱旋转蒸发仪氮气浓缩仪分析步骤5试样制备5.1水产品取其可食部分 (去骨),切成小块,制成肉糜于-18℃以下保存试样提取5.2取试样200g置于塑料袋内 ,于70℃水浴15min取出冷却后,加丙酮400mL,均质10min,用布氏漏斗抽滤并收集滤液肉渣再重复萃取两次合并滤液,于55℃旋转蒸发浓缩至近干加入100mL甲醇溶液(90%)溶解,转移至500mL分液漏斗中,再加入100mL正己烷,充分振荡萃取 ,静置约30min以上,待分层完全,弃去上层正己烷层,收集下层甲醇溶液层 再加入100mL正己烷重复萃取一次将下层的甲醇溶液于 55℃旋转蒸发至干,以100mL乙醇溶液(25%)溶解,并转移至分液漏斗中,加入100mL乙醚充分振荡萃取 ,静置10min以上,待分层完全,收集上层乙醚层下层溶液再用乙醚萃取两次 合并乙醚萃取液 ,于40℃旋转蒸发至近干 浓缩物用5mL氯仿-甲醇溶液(3+97)溶解并转移至刻度试管中 ,于45℃用氮气浓缩至干,用1%吐温60-生理盐水定容至2mL,充分振荡,制成均匀西加毒素-1%吐温60-生理盐水混悬液 0.5mL该混悬液相当于 50g试样以此混悬液进行小鼠实验注:为避免毒素的危害 ,应戴手套进行操作 ,用过的器材应在次氯酸钠溶液(5%)中浸泡1h以上,以使毒素分解 小鼠试验5.3实验动物的饲养5.3.1小鼠在通风透光清洁的室内环境饲养,实验期间正常供给标准啮