中华人民共和国国家标准GB5009.273—2016食品安全国家标准水产品中微囊藻毒素的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.273—2016前言本标准代替SN/T2678—2010《进出口淡水产品中微囊藻毒素的检测方法 酶联免疫吸附法》本标准与SN/T2678—2010相比,主要变化如下 :———标准名称修改为 “食品安全国家标准 水产品中微囊藻毒素的测定 ”;———增加了液相色谱-串联质谱法ⅠGB5009.273—2016食品安全国家标准水产品中微囊藻毒素的测定范围1本标准规定了水产品中微囊藻毒素 (环状七肽)的液相色谱串联质谱和间接竞争酶联免疫吸附的-测定方法本标准适用于鱼 虾河蚌等水产品中微囊藻毒素的测定 第一法液相色谱-串联质谱法原理2试样中的微囊藻毒素 (MC-LR,MC-RR和MC-YR)经甲醇溶液提取,固相萃取小柱净化, 液相色谱-串联质谱测定 ,外标法定量试剂和材料3除非另有说明 ,本方法所用试剂均为分析纯 ,水为GBT6682/ 规定的一级水试剂3.1甲醇( ):色谱纯3.1.13.1.23.1.33.1.4CHO4甲酸( ):色谱纯CHO2 2甲酸铵():色谱纯CHON5 2乙腈( ):色谱纯CHN2 33.1.5氮气:纯度≥99.99%试剂配制3.23.2.1甲醇溶液(20%):将20mL甲醇与80mL水混合均匀3.2.2甲醇溶液(80%):将80mL甲醇与20mL水混合均匀淋洗溶液: 水;甲醇溶液(20%)10mL 10mL3.2.33.2.4含0.1%甲酸的甲醇溶液:用甲醇将0.1mL甲酸定容至100mL标准品3.3-LR MC-LRC49H74N10O12,CAS号101043-37-2微囊藻毒素标准品 :微囊藻毒素 ( ,)微囊藻毒素-)微囊藻毒素 ( ,YR(MC-YRC,52H72N10O13,CAS号101064-48-6 -RR MC-RRC49H75N13O12,CAS号111755-37-4),纯度均≥95%标准溶液配制3.4微囊藻毒素标准储备液 (/ ):分别称取微囊藻毒素标准品10 gmLμMC-LRMC-YRMC-RR各3.4.11GB5009.273—20160.5mg(按实际含量折算 ,精确至0.01mg),用500μL甲醇溶解,再用水定容至 50mL标准储备液贮存于密闭棕色玻璃瓶中 ,于-20℃储存,有效期为3个月3.4.210gmL10 L于10mL容量瓶中,用标准中间液(10ngmL/):吸取微囊藻毒素标准储备液 (/ )μμ甲醇定容至刻度 标准中间液于 -20℃冷冻避光保存 ,有效期为3个月基质匹配的混合标准系列工作液 :用空白基质溶液将微囊藻毒素标准中间溶液(10ngmL/)稀释3.4.3成含量为 / / / //和/的混合标准系列工作液现用0.1gL0.2gL0.5gL1.0gL2.0gL5.0gLμμμμμμ现配材料3.53.5.1固相萃取小柱 :ODSC18柱,500mg6mL/ ,或性能相当者 有机相微孔滤膜 :0.22μm3.5.23.5.3玻璃纤维滤纸 :GFF/规格,或性能相当者 仪器和设备4液相色谱-质谱仪:配有电喷雾离子源 4.14.2分析天平:感量为0.001g和0.00001g离心机:转速大于8000rmin/均质器4.34.44.54.6旋转蒸发仪涡旋振荡器分析步骤试样制备55.1取样品的可食部分约500g,充分均质或粉碎,装入洁净容器中,密封,并标明标记 试样置于-18℃以下避光保存 ,一个月内须完成检测 提取5.2准确称取5g(精确至0.01g)试样,置于50mL离心管中,加入10mL甲醇溶液(80%),充分振荡8000rmin离心10min,取上清液于新离心管中 残渣重复提取一次 ,合并两次提取液 ,提取液均匀, /定容至30mL,以玻璃纤维滤纸过滤 取6mL滤液加入30mL水稀释待净化净化5.3C18固相萃取小柱使用前依次用 10mL甲醇和10mL水活化,