中华人民共和国国家标准GB 5413.3—2010食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中脂肪的测定 National food safety standard Determination of fat in foods for infants and young children, milk and milk products 2010-03-26发布2010-06-01实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布 GB5413.3—2010前言本标准代替 GB/T5009.46-2003《乳与乳制品卫生标准的分析方法》中脂肪的测定、GB/T 5409-85《牛乳检验方法》中脂肪的测定、GB/T 5416-85《奶油检验方法》中脂肪的测定、GB/T 5413.3-1997《婴幼儿配方食品和乳粉脂肪的测定》。本标准的附录 A为欧亿·体育（中国）有限公司性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB/T 5409-85；——GB/T 5413.3-1997；——GB/T 5416-85；——GB 5009.46-1985、GB/T 5009.46-1996、GB/T 5009.46-2003。I? GB5413.3—2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中脂肪的测定1范围本标准规定了巴氏杀菌乳、灭菌乳、生乳、发酵乳、调制乳、乳粉、炼乳、奶油、稀奶油、干酪和婴幼儿配方食品中脂肪的测定方法。本标准第一法适用于巴氏杀菌乳、灭菌乳、生乳、发酵乳、调制乳、乳粉、炼乳、奶油、稀奶油、干酪和婴幼儿配方食品中脂肪的测定；第二法适用于巴氏杀菌乳、灭菌乳、生乳中脂肪的测定。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。第一法3原理用乙醚和石油醚抽提样品的碱水解液，通过蒸馏或蒸发去除溶剂，测定溶于溶剂中的抽提物的质量。4试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的三级水。4.1淀粉酶：酶活力≥1.5 U/mg。4.2氨水（NH4OH）：质量分数约 25%。注：可使用比此浓度更高的氨水。4.3乙醇（C2H5OH）：体积分数至少为 95%。4.4乙醚（C4H10O）：不含过氧化物，不含抗氧化剂，并满足试验的要求。4.5石油醚（CnH2n+2）：沸程 30℃～60℃。4.6混合溶剂：等体积混合乙醚（4.4）和石油醚（4.5），使用前制备。4.7碘溶液（I2）：约 0.1 mol/L。4.8刚果红溶液（C32H22N6Na2O6S2）：将 1 g刚果红溶于水中，稀释至100 mL。注：可选择性地使用。刚果红溶液可使溶剂和水相界面清晰，也可使用其他能使水相染色而不影响测定结果的溶液。4.9盐酸（6 mol/L）：量取 50 mL盐酸（12mol/L）缓慢倒入 40 mL水中，定容至100 mL，混匀。5仪器和设备1 GB5413.3—20105.1分析天平：感量为 0.1 mg。5.2离心机：可用于放置抽脂瓶或管，转速为 500转/分钟～600转/分钟，可在抽脂瓶外端产生 80 g～90 g的重力场。5.3烘箱。5.4水浴。5.5抽脂瓶：抽脂瓶应带有软木塞或其他不影响溶剂使用的瓶塞（如硅胶或聚四氟乙烯）。软木塞应先浸于乙醚中，后放入 60℃或60℃以上的水中保持至少15 min，冷却后使用。不用时需浸泡在水中，浸泡用水每天更换一次。注：也可使用带虹吸管或洗瓶的抽脂管（或烧瓶），但操作步骤有所不同，见附录 A中规定。接头的内部长支管下端可成勺状。6分析步骤6.1用于脂肪收集的容器（脂肪收集瓶）的准备于干燥的脂肪收集瓶中加入几粒沸石，放入烘箱中干燥1h。使脂肪收集瓶冷却至室温，称量，精确至0.1 mg。注：脂肪收集瓶可根据实际需要自行选择。6.2空白试验空白试验与样品检验同时进行，使用相同步骤和相同试剂，但用10 mL水代替试样。6.3测定6.3.1巴氏杀菌乳、灭菌乳、生乳、发酵乳、调制乳称取充分混匀试样10 g（精确至0.0001 g）于抽脂瓶中。6.3.1.1加入 2.0 mL氨水（4.2），充分混合后立即将抽脂瓶放入65℃±5℃的水浴中，加热 15 min～20min，不时取出振荡。取出后，冷却至室温。静止 30 s后可进行下一步骤。6.3.1.2加入 10mL乙醇（4.3），缓和但彻底地进行混合，避免液体太接近瓶颈。如果需要，可加入两滴刚果红溶液（4.8）。6.3.1.3加入 25mL乙醚（4.4），塞上瓶塞，将抽脂瓶保持在水平位置，小球的延伸部分朝上夹到摇混器上，按约 100次/min振荡 1 min，也可采用手动振摇方式。但均应注意避免形成持久乳化液。抽脂瓶冷却后小心地打开塞子，用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈，使冲洗液流入抽脂瓶。6.3.1.4加入 25 mL石油醚（4.5），塞上重新润湿的塞子，按6.3.1.3所述，轻轻振荡30 s。6.3.1.5将加塞的抽脂瓶放入离心机中，在 500转/分钟～600转/分钟下离心 5min。否则将抽脂瓶静止至少 30 min，直到上层液澄清，并明显与水相分离。6.3.1.6小心地打开瓶塞，用少量的混合溶剂（4.6）冲洗塞子和瓶颈内壁，使冲洗液流入抽脂瓶。如果两相界面低于小球与瓶身相接处，则沿瓶壁边缘慢慢地加入水，使液面高于小球和瓶身相接处（见图1），以便于倾倒。6.3.1.7将上层液尽可能地倒入已准备好的加入沸石的脂肪收集瓶中，避免倒出水层（见图 2）。2 GB5413.3—2010图1 倾倒醚层前图2 倾倒醚层后6.3.1.86.3.1.9用少量混合溶剂冲洗瓶颈外部，冲洗液收集在脂肪收集瓶中。要防止溶剂溅到抽脂瓶的外面。向抽脂瓶中加入 5 mL乙醇，用乙醇冲洗瓶颈内壁，按 6.3.1.2所述进行混合。重复6.3.1.3～6.3.1.8操作，再进行第二次抽提，但只用15 mL乙醚和15 mL石油醚。6.3.1.10重复6.3.1.2～6.3.1.8操作，再进行第三次抽提，但只用15 mL乙醚和15 mL石油醚。注：如