中华人民共和国国家标准GB 5413.27—2010食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定 National food safety standard Determination of fatty acids in foods for infants and young children, milk and milk products 2010-03-26发布2010-06-01实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布 GB5413.27—2010前言本标准代替GB/T 21676-2008《婴幼儿食品和乳品脂肪酸的测定》、GB/T5413.27-1997《婴幼儿配方食品和乳粉DHA、EPA的测定》、GB/T 5413.4-1997《婴幼儿配方食品和乳粉亚油酸的测定》。本标准与原标准相比，主要变化如下：——第一法为乙酰氯—甲醇甲酯化法；——将GB/T 21676-2008、GB/T 5413.27-1997、GB/T 5413.4-1997合并为本标准第二法氨水—乙醇提取法。本标准中附录A为欧亿·体育（中国）有限公司性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB/T 5413.4-1997、GB/T 5413.27-1997；——GB/T 21676-2008。I? GB5413.27—2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定1范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定，第二法不适用于含有被包埋脂肪酸的测定。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。第一法 乙酰氯—甲醇甲酯化法3原理乙酰氯与甲醇反应得到的盐酸—甲醇使试样中的脂肪和游离脂肪酸甲酯化，用甲苯提取后，经气相色谱仪分离检测，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T 6682规定的一级水。4.1无水碳酸钠。4.2甲苯：色谱纯。4.3乙酰氯。4.4乙酰氯甲醇溶液（体积分数为 10 %）：量取 40 mL甲醇于100 mL干燥的烧杯中，准确吸取 5.0mL乙酰氯（4.3）逐滴缓慢加入，不断搅拌，冷却后转移并定容至50 mL干燥的容量瓶中。临用前配制。注：乙酰氯为刺激性试剂，配制乙酰氯甲醇溶液时应不断搅拌防止喷溅，注意防护。4.5碳酸钠溶液：准确称取 6 g无水碳酸钠（4.1）于100 mL烧杯中，加水溶解，转移并用水定容至100 mL容量瓶中。4.6脂肪酸甘油三酯标准品：纯度≥99 %，脂肪酸种类参见附录 A中的表A.1。4.7脂肪酸甘油三酯标准工作液：按试样中各脂肪酸含量及所要分析脂肪酸的种类配制适当浓度的标准工作液，用甲苯定容并分别保存于－10℃以下的冰箱中，有效期三个月。5仪器和设备1 GB5413.27—20105.15.25.35.45.55.65.75.8天平：感量为 0.01 g和0.1 mg。恒温热水浴槽。离心机：转速≥5000转/分钟。气相色谱仪，带 FID检测器。冷冻干燥仪。氮吹仪。螺口玻璃管（带有聚四氟乙烯做内垫的螺口盖）：15 mL。离心管：50mL。6分析步骤6.1试样处理6.1.16.1.26.1.3试样含水量大于 5 %时，冷冻干燥至含水量小于 5 %。称取试样 0.5 g（精确到 0.1 mg）于 15 mL干燥螺口玻璃管（5.7）中，加入5.0 mL甲苯（4.2）。称取无水奶油试样 0.2g（精确到 0.1 mg）于 15mL干燥螺口玻璃管（5.7）中，加入5.0mL甲苯（4.2）。6.2甲酯化提取6.2.1试样测定液的制备在试样（6.1.2或6.1.3）中加入10 %乙酰氯甲醇溶液6.0mL（4.4），充氮气后，旋紧螺旋盖，振荡混合后于80℃±1℃水浴中放置2h，期间每隔20min取出振摇一次，水浴后取出冷却至室温。将反应后的样液转移至50 mL离心管中，分别用3.0mL碳酸钠溶液（4.5）清洗玻璃管三次，合并碳酸钠溶液（4.5）于50 mL离心管（5.8）中，混匀，5000转/分钟离心约5 min。取上清液作为试液，气相色谱仪测定。6.2.2标准测定液的制备准确吸取脂肪酸甘油三酯标准工作液（4.7）0.5 mL于15 mL螺口玻璃管（5.1）中，加入4.5 mL甲苯，其他操作步骤同6.2.1。6.3色谱参考条件色谱柱：固定液100 %二氰丙基聚硅氧烷，100 m ×0.25 mm，0.20 μm，或性能相当的色谱柱。载气：氮气。载气流速：1.0 mL/min。进样口温度：260℃。分流比：30：1。检测器温度：280℃。柱温箱温度：初始温度140℃，保持5min，以4℃/min升温至240℃，保持15 min。进样量：1.0 μL。6.4试样溶液的测定2 GB5413.27—2010分别准确吸取1.0μL脂肪酸标准测定液（6.2.2）及试样测定液（6.2.1）注入色谱仪，平行测定次数不少于两次，以色谱峰峰面积定量。7分析结果的表述7.1试样中各脂肪酸的含量的计算试样中各脂肪酸的含量按公式（1）计算：si×Cstdi×Fj ×100……………………………………………………………（1）Xi=AAstdi×m式中：X i ——试样中各脂肪酸的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；Asi ——试样测定液中各脂肪酸的峰面积；Cstdi——在标准测定液的制备（6.2.2）中吸取的脂肪酸甘油三酯标准工作液中所含有的标准品的质量,单位为毫克（mg）；Fj ——各脂肪酸甘油三酯转化为脂肪酸的换算系数，参见附录 A中的表A.1；Astdi ——标准测定液中各脂肪酸的峰面积；m ——试样的称样质量，单位为克（g）。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。7.2试样中总脂肪酸的含量计算试样中总脂肪酸的含量按公式（2）计算：XTotalFA =∑X i………………………………………………………………………（