中华人民共和国国家标准GB 5413.17—2010食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中泛酸的测定 National food safety standard Determination of pantothenic acid in foods for infants and young children, milk and milk products 2010-03-26发布2010-06-01实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布 GB5413.17—2010前言本标准第一法为等同采用国际分析家学会（AOAC）945.74 Pantothenic Acid in Vitamin Preparations。本标准代替GB/T 5413.17-1997《婴幼儿配方食品和乳粉泛酸的测定》。本标准与GB/T 5413.17-1997相比，第一法主要变化如下：——增加了 tris缓冲液配制方法；——确定了测定波长；——增加了标准曲线绘制的文字描述。第二法主要变化如下：——更换了色谱柱；——改变了流动相；——增加了含淀粉类试样进行酶解的处理方法。本标准的附录A为欧亿·体育（中国）有限公司性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB 5413-1985、GB/T 5413.17-1997。I? GB5413.17—2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中泛酸的测定1范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中泛酸的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中泛酸的测定。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。第一法微生物法3原理利用植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）ATCC 8014对泛酸的特异性，在含有泛酸样品中生长产生的酸度和形成的光密度来测定泛酸的含量。4试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯试剂，水为 GB/T 6682规定的二级水。4.10.9 %生理盐水：9.0 g氯化钠溶解于1000 mL水中，分装于具塞试管中，每管10 mL，121℃灭菌15 min。每周准备一次。4.2泛酸钙标准品。4.3乙酸溶液（0.2 mol/L）：吸取 12 mL冰乙酸用水稀释至1000 mL。4.4甲苯（C7H8）。4.5乙酸钠溶液（0.2 mol/L）：溶解 16.4 g无水乙酸钠于水中，稀释至1000 mL。4.6菌株：植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）ATCC 8014。4.7培养基4.7.1乳酸杆菌琼脂培养基：光解胨 15 g，酵母浸膏 5 g，葡萄糖 10 g，番茄汁 100mL，磷酸二氢钾2 g，聚山梨糖单油酸酯 1 g，琼脂 10 g，加蒸馏水至 1000 mL，调 pH至6.8 ± 0.2（20℃～25℃）。4.7.2乳酸杆菌肉汤培养基：光解胨 15 g，酵母浸膏 5 g，葡萄糖 10 g，番茄汁 100mL，磷酸二氢钾2 g，聚山梨糖单油酸酯 1 g，加蒸馏水至 1000 mL，调 pH至6.8 ±0.2（20℃～25℃）。4.7.3泛酸测定用培养基：葡萄糖 40 g，乙酸钠 20 g，无维生素酸水解酪蛋白 10 g，磷酸氢二钾 1 g，磷酸二氢钾 1 g，L-胱氨酸 0.4 g，L-色氨酸 0.1 g，硫酸镁 0.4 g，氯化钠 20 mg，硫酸亚铁 20 mg，硫酸锰 20 mg，硫酸腺嘌呤 20 mg，盐酸鸟嘌呤 20 mg，尿嘧啶 20 mg，胡萝卜素 400 μg，盐酸硫胺素 200 μg，1 GB5413.17—2010生物素 0.8 μg，p-氨基苯甲酸 200 μg，烟酸 1 mg，盐酸吡哆醇 800 μg，聚山梨糖单油酸酯0.1 g，加蒸馏水至 1000 mL，调 pH至6.7±0.1（20℃～25℃）。4.8Tris缓冲液：称取24.2 g Trizma Base于烧杯中，加200 mL水溶解。4.9盐酸（0.1 mol/L）：吸取 8.3 mL盐酸，用水稀释至1000 mL。4.10标准溶液4.10.1泛酸标准贮备液（40 μg/mL）：精确称取 45mg～55 mg泛酸钙标准品（4.2），溶入500mL蒸馏水中，加 10 mL乙酸溶液 （4.3），加100 mL乙酸钠溶液（4.5），用水稀释至泛酸钙精确浓度为43.47 μg/mL（即泛酸浓度为 40μg/mL），加 0.5 mL甲苯（4.4）贮于 2 ℃～4 ℃冰箱中，保存期为4个月。4.10.2泛酸中间贮备液（1 μg/mL）：取 25 mL标准贮备液（4.10.1），加入蒸馏水500 mL，乙酸溶液 10 mL（4.3），乙酸钠溶液 100 mL（4.5），再用水稀释至 1 L。加 0.5 mL甲苯（4.4）贮于冰箱中（2℃～4℃），保存期为1个月。4.10.3泛酸标准工作液（10 ng/mL，5ng/mL）：吸两次 5.0 mL中间贮备液（4.10.2），分别用水定容至 500 mL和1000 mL，临用前配制。5仪器和设备5.1分光光度仪。5.2pH 计：精度为 0.01。5.3涡旋振荡器。5.4天平：感量 0.1 mg。5.5生化培养箱：36℃± 0.5℃。5.6离心机：转速≥2000转/分钟。6分析步骤6.1测试菌液的制备6.1.1把植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）ATCC 8014冻干菌粉转入乳酸杆菌肉汤培养基（4.7.2）试管中，36℃± 1℃培养24 h。再转接至乳酸杆菌琼脂培养基（4.7.1）试管中，36℃± 1℃培养24 h。培养好的乳酸杆菌琼脂培养基（4.7.1）试管的培养物作为贮备菌种。6.1.2从贮备菌种培养基上分别转接到三个乳酸杆菌琼脂培养基（4.7.1）试管中，放入培养箱中 36℃± 1℃培养24 h。每月转接一次，作为月接种管贮于冰箱中。每月定期从月接种管中重新接种 3个转接管保存新菌株。6.1.3从月接种的培养管中的一支再接种一支乳酸杆菌琼脂培养基（4.7.1）试管，36℃±1℃培养