中华人民共和国国家标准GB 5413.26—2010食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定National food safety standard Determination of taurine in foods for infants and young children,milk and milk products 2010-03-26发布2010-06-01实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布 GB5413.26—2010前言本标准第二法等同采用国际分析家学会（ AOAC）AOAC997.05Taurine inpowderedmilkandpowdered infant formulae。本标准代替GB/T 5413.26-1997《婴幼儿食品和乳粉牛磺酸的测定》。本标准与GB/T 5413.26-1997相比，主要变化如下：——将原标准方法OPA柱后衍生高效液相色谱法定为第一法；——增加单磺酰氯柱前衍生高效液相色谱法为第二法；——对原标准的结构进行了修改。——外标法定量采用标准曲线法；——增加附录 A标样的液相色谱图。本标准附录A为欧亿·体育（中国）有限公司性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB 5413-1985、GB/T 5413.11-1997。I? GB5413.26—2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定1范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。第一法OPA 柱后衍生法3原理样品用偏磷酸溶液溶解，经超声波振荡提取、离心、微孔滤膜过滤后，通过钠离子色谱柱分离，与邻苯二甲醛（OPA）衍生反应，用荧光检测器进行检测，外标法定量。4试剂和材料除非另有规定，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的一级水。4.14.24.34.44.54.64.74.84.94.104.114.12偏磷酸（HPO3）。柠檬酸三钠(Na3C6H5O7·2H2O)。苯酚(C6H6O)。硝酸(HNO3)。甲醇(CH3OH)：色谱纯。硼酸(H3BO3)。氢氧化钾(KOH)。邻苯二甲醛(C8H6O2)（OPA）。2-巯基乙醇(C2H6OS)。聚氧乙烯月桂酸醚（Brij-35）。牛磺酸标准品：纯度≥99%。偏磷酸溶液（10 g/L）：称取10.0 g偏磷酸（4.1），用水溶解并定容至1000 mL。1 GB5413.26—20104.13柠檬酸缓冲液：称取 19.6 g柠檬酸三钠（4.2），加950 mL水溶解，加入1 mL苯酚（4.3），用硝酸（4.4）调 pH值至3.10～3.25，经0.45μm微孔滤膜过滤。4.14柱后荧光衍生溶剂（邻苯二甲醛溶液）4.14.1硼酸钾溶液（0.5 mol/L）：称取 30.9g硼酸（4.6），26.3g氢氧化钾（4.7），用水溶解并定容至 1000 mL。4.14.2邻苯二甲醛衍生溶液：称取 0.60 g邻苯二甲醛（4.8），用10 mL甲醇（4.5）溶解后，加入 0.5mL 2-巯基乙醇（4.9）和 0.35 g Brij-35（4.10），用 0.5 mol/L的硼酸钾溶液（4.14.1）定容至1000 mL，经 0.45 μm微孔滤膜过滤。临用前配制。4.15牛磺酸标准溶液4.15.1牛磺酸标准储备溶液（1mg/mL）：准确称取 0.1000g牛磺酸标准品（4.11），用水溶解并定容至 100 mL。储备液在 4℃下可保存 7天。4.15.2牛磺酸标准工作液：将牛磺酸标准储备液（4.15.1）用水稀释制备一系列标准溶液，标准系列浓度为：0、5、10、15、20 μg/mL。临用前配制。5仪器和设备5.15.25.35.45.55.65.75.8高效液相色谱仪，带有荧光检测器。柱后反应器。荧光衍生溶剂输液泵。超声波振荡器。pH计：精度为0.01。离心机：转速≥5000转/分钟。0.45 μm微孔滤膜。天平：感量为 1mg，0.1mg。6分析步骤6.1试样的处理准确称取固体样品 1 g～5 g试样，液体样品5 g～20 g（精确至 0.01g，试样中含牛磺酸 5 μg以上），加 30 mL偏磷酸溶液（4.12）溶解，充分摇匀，移入100 mL容量瓶中；放入超声波振荡器中振荡10 min～15 min，取出冷却至室温后，用水定容至刻度；样液在 5000转/分钟条件下离心10 min，取上清液经0.45μm微孔膜（5.7）过滤，接取中间滤液以备进样。6.2测定6.2.1参考色谱条件色谱柱：钠离子氨基酸分析专用柱（250 mm×4.6 mm）或同等性能的色谱柱。流动相：柠檬酸缓冲液（4.13）。流动相流速：0.30 mL/min。2 GB5413.26—2010荧光衍生溶剂流速：0.30 mL/min。柱温：55℃。检测波长：激发波长：338 nm，发射波长：425 nm。进样量：20 μL。6.2.2标准曲线绘制将牛磺酸标准系列工作液（4.15.2）依次经衍生后按上述推荐色谱条件上机测定，记录色谱峰面积，色谱图参见附录 A。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。6.2.3试液测定将试液按上述推荐色谱条件上机测定，从标准曲线中查得试液相应的浓度。7分析结果的表述7.1结果计算X =c×V ×100m×1000………………………………………………………………………(1)式中：X ——试样中牛磺酸的含量，单位为毫克/100克（mg/100g）；c ——试液的进样浓度，单位为微克/毫升（μg/mL）；V——试样定容容积，单位为毫升（mL）；m——试样质量，单位为克（g）。7.2结果表示以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。第二法单磺酰氯柱前衍生法