ICS07.100DB21B 41辽宁省地方标准 DB21/T 2743—2017 动物源细菌抗菌药物敏感性检测 Bacterial antimicrobial susceptibility testing of animal origin 2017-02-23发布2017-03-23实施辽宁省质量技术监督局发 布DB21/T 2743—2017前言本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2015给出的规则起草。本标准由辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心和中国兽医药品监察所联合提出。本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。本标准起草单位：辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心、中国兽医药品监察所本标准主要起草人：李欣南、韩镌竹、许彬、李洪伟、高红倩、韩春晓、高铎、武凤娇、苏葳艺、李永才、李香珍、宋立、张纯萍。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。IDB21/T 2743—2017动物源细菌抗菌药物敏感性检测1范围本标准规定了动物源细菌常见药物的微量肉汤稀释法药物敏感性试验所需的试剂和材料、仪器设备、操作步骤和质量控制。本标准适用于动物源非苛氧菌常见抗菌药物的微量肉汤稀释法药物敏感性试验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 19489 实验室生物安全通用要求GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3原理微量肉汤稀释法是定量检测某一抗菌药物对动物源细菌的体外抑菌活性的一种标准方法。在每块药敏板上，都设有一系列稀释浓度的抗菌药物试剂，及阳性对照和阴性对照，通过加入待检细菌的菌悬液，经一定时间的孵育后，用微生物鉴定药敏分析系统或肉眼判读的方法对药敏板条进行读数，经数据分析得到最小抑菌浓度（MIC）值。试剂和材料4试剂和材料4.1化学试剂除非另有说明，使用的试剂为分析纯或生化试剂，所有实验室使用的试剂等级应为不含微生物的分析纯试剂，试剂的选购、验收、储存应符合规定。4.2实验用水除非另有规定，实验用水应符合GB/T 6682中三级水的规格。4.3琼脂培养基：见附录 A中A.1。4.44.5Mueller-Hinton肉汤（M-H肉汤）培养基：见附录 A中A.2。0.85%无菌生理盐水称取8.50g（精确到0.01g）分析纯氯化钠，加入1L蒸馏水溶解后121℃15min高压灭菌。4.6抗菌药物1DB21/T 2743—2017使用标准品或对照品，参照中华人民共和国兽药典或CLSI的M07-A10、M37-A3和M45-A3进行溶解。4.7药敏检测板按产品说明进行操作使用。4.8质控菌株应选用来自国家级微生物菌种保藏中心的标准菌株或具有资质的菌种保藏机构提供的分类明确的菌株。质控菌株的使用代次为3~5代，质控菌株应至少30天更换一次，由冻干或超低温冷冻保存菌种移种或购买新菌种。5仪器设备5.1恒温培养箱 ：精度 36 ± 1℃。5.2分析天平：感量为 0.01g和0.00001g。5.3无菌操作台：可满足无菌要求的生物安全柜、超净台或无菌室等。5.4多道移液器：量程 20~200μL、100~1000μL、1000~10000μL。5.5麦氏比浊仪：量程 0～5 MCF。5.6自动加样器。5.7药敏结果判定仪。6测定程序动物源细菌抗菌药物敏感性检测程序见图1。图1动物源细菌抗菌药物敏感性检测程序图2DB21/T 2743—20177操作步骤7.1菌落培养接种的菌落由新鲜的划线平板菌落来制备，按要求选择琼脂培养基平板进行接种，除特殊要求培养时间不超过24小时。7.2菌液制备用接种环挑取琼脂平板上培养16～18小时的3～5个单菌落，用0.85%无菌生理盐水或M-H肉汤稀释至0.5麦氏单位，菌液浓度约为1～2×108CFU/mL。7.3抗菌药物工作溶液的制备7.3.1溶剂和稀释液用于制备抗菌药物储备液的溶剂和稀释液，除蒸馏水可高压灭菌外，其余应采用0.22μm微孔滤膜过滤除菌。7.3.2抗菌药物储备液的制备抗菌药物储备液的浓度应至少为最高测试浓度的10倍或者1000μg/mL以上，