ICS 65.020.30 B 44 DB14 山西省地方标准 DB 14/T 1942—2019 实验动物 中国地鼠微卫星DNA检测方法 Laboratory animal Method for microsatellite markers of Chinese hamster 2019 - 12 - 01发布 2020 - 02 - 01实施 山西省市场监督管理局 发布 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 术语和定义 ........................................................................ 1 3 抽样 .............................................................................. 1 4 方法 .............................................................................. 2 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则编写。 本标准由山西省科学技术厅提出、归口并监督实施。 本标准起草单位：山西医科大学。 本标准主要起草人：宋国华、刘田福、陈朝阳、高继萍、张锐虎、续国强。 实验动物 中国地鼠微卫星DNA检测方法 1 范围 本标准规定了实验动物 中国地鼠（以下简称实验中国地鼠）遗传检测抽样数量及微卫星DNA检 测方法。 本标准适用于实验中国地鼠品系鉴别、质量控制及遗传组成分析。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 实验中国地鼠 laboratory Chinese hamster 指经人工饲育，对其携带的微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研究、 教学、生产和检定以及其它科学实验的中国地鼠 (Gricetulus griseus)。 2.2 近交系中国地鼠 inbred strain Chinese hamster 以全同胞或亲子交配方式繁殖20代以上的中国地鼠，近交系数达98.6%以上。 2.3 封闭群中国地鼠 closed colony Chinese hamster 以非近亲交配方式繁殖中国地鼠，在不从外部引入新个体的条件下，至少连续繁殖4代以上。 2.4 微卫星DNA microsatellite DNA 是指基因组中由1～6个碱基组成的串联重复序列。不同个体的重复数不同而形成了微卫星DNA 的多态性。 3 抽样 对近交系中国地鼠抽样数量不做要求。每个封闭群随机抽取非同窝成年实验中国地鼠，雌雄各半。 采样数量按表1进行。 表1 封闭群实验中国地鼠遗传检测抽样要求 群体数量（只） 抽样数量（只） 少于 100 ≥15 大于 100 ≥30 4 方法 4.1 采样 观察动物外观，核对编号，中国地鼠取0.5 cm尾尖组织或眼眶静脉丛采血，-20℃低温保存。 4.2 微卫星位点的选择 各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因数、PCR 反应的退火温度见表2。PCR引物的5’端用 FAM荧光染料进行标记。近交系中国地鼠在表2中选择10个微卫星位点，封闭群中国地鼠在表2中选 择15个微卫星位点。 表2 中国地鼠微卫星位点 位点 引物序列 退火温度 (°C) 片段大小 最大等位基因数 Chm35 F: AGGCTGCTTCCTAAACCCAT 51 354-391 4 R: CTGGGAAGGCTGAACTCAAG Chm93 F: TCTGT