ICS65.020DB34B 16安徽省地方标准DB 34/T 3127—2018 瓜蒌根结线虫病的病原检测和防治 技术规程 Technical regulation for pathogen detection and disease control of Root-knot nematode disease on Trichosanthes kirilowii 2018-04-16发布2018-05-16实施安徽省质量技术监督局发 布 DB34/T 3127—2018前言本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草本标准由潜山县植物检疫保护站提出本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口本标准起草单位：潜山县植物检疫保护站安徽农业大学植物保护学院本标准主要起草人：吴彩玲吴慧平徐劲峰鞠玉亮黄为民吴彩萍李武伦朱松涛吴智I DB34/T 3127—2018瓜蒌根结线虫病的病原检测和防治技术规程1范围本标准规定了瓜蒌根结线虫病的症状识别病原物鉴定防治原则和防治措施等方面的内容本标准适用于安徽省瓜蒌根结线虫病的病原检测和防治技术2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则NY/T 496肥料合理使用准则 通则NY/T 1276农药安全使用规范总则DB34/T 882食用栝楼栽培技术规程3症状识别3.1在瓜蒌田间查找生长缓慢矮化黄化的瓜蒌植株拔起植株观察根系如根系上出现根结须根团可初步判断为根结线虫病危害区别于缺水缺肥症状撕开根结处表皮如发现针尖大小白色小点即为根结线虫雌虫区别于根肿病根癌病3.2根部症状可参照附录A 进行判断4病原物鉴定4.1形态学鉴定根结线虫的形态学鉴定基于二龄幼虫和雌虫的形态及其测计值具体流程如下：——用挑针剥离瓜蒌根结上的卵块25℃处理 24h 孵化二龄幼虫此外用挑针剥离根结处雌虫——在显微镜下观察二龄幼虫和雌虫形态并对其主要形态进行测计测计值需遵循 DeMan 公式根结线虫二龄幼虫和雌虫的形态描述参照附录B测计值参照附录C根据形态及其测计值即可判断是否为根结线虫4.2分子生物学鉴定根结线虫分子生物学鉴定基于单条二龄幼虫或雌虫具体流程如下：——用挑针剥离瓜蒌根结上的卵块25℃处理 24 h 孵化二龄幼虫或用挑针剥离根结处雌虫——将单条二龄幼虫置于含 8 μL ddH2O 和 1μL 10×Ex Taq Buffer（Mgfree）的 200 μL PCR2+管中；液氮中处理 1 min95℃处理 2 min重复三次；向 PCR 管中加入 1μL 1 mg/mL 蛋白酶 K65℃温育 1 h 后95℃处理 10 min所得单条线虫 DNA 用于下游的 PCR 检测试验1