ICS11.220B 41DB34安徽省地方标准DB 34/T 2795—2016 猪传染性胃肠炎病毒与猪流行性腹泻病毒二重RT-PCR检测方法 Duplex RT-PCR assay for detection of porcine transmissible gastroenteritis virus and porcine epidemic diarrhea virus 2016-12-30发布2017-01-30实施安徽省质量技术监督局发 布 DB34/T 2795—2016前言本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草本标准由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提出本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口本标准起草单位：安徽省农业科学院畜牧兽医研究所本标准起草人：潘孝成张丹俊赵瑞宏沈学怀戴银胡晓苗杨永新周学利侯宏艳王重龙李庆岗张玉王杨龙陈福军何为俊I DB34/T 2795—2016猪传染性胃肠炎病毒与猪流行性腹泻病毒二重RT-PCR检测方法1范围本标准规定了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)与猪流行性腹泻病毒（PEDV）二重 RT-PCR 检测方法的技术要求本标准适用于猪肠内容物粪便以及细胞培养物中 TGEV 和/或 PEDV 核酸的检测2缩略语下列缩略语适用于本文件TGEV：猪传染性胃肠炎病毒 (porcine transmissible gastroenteritis virus）PEDV：猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus）PCR：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（reverse transcription-polymerase chain reaction）RNA：核糖核酸（ribonucleic acid）DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid）DEPC：焦炭酸二乙酯（diethylpyrocarbonate）Taq酶：Taq DNA聚合酶（Taq DNA polymerase）dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleoside triphosphate）M-MLV：莫洛尼氏鼠白血病病毒（moloney murine leukemiavirus）PBS：磷酸缓冲液（phosphate buffer solution）TAE：Tris-乙酸电泳缓冲液（tris acetate-EDTA buffer）EB：溴化乙锭（ethidium bromide）3主要仪器3.1PCR扩增仪3.2台式低温高速离心机（最大离心力12000 g 以上）3.3电泳仪3.4凝胶成像系统3.5冰箱（-20℃；-80℃）3.6微波炉3.7分析天平（准确度0.01 g以上）3.8水浴锅3.9微量移液器（2.5μL ；10 μL；200μL；1000μL）4试剂和材料1