ICS67.060 B22 DB36 备案号：48489-2016 江西省地方标准 DB 36/ T 885—2015 南方水稻黑条矮缩病毒RT-PCR检测技术规 范 Rule of RT-PCR Detection on Southern Rice Black-streaked Dwarf Virus 2015-12-21发布 2016-03-15实施 江西省质量技术监督局发 布   DB36/ T 885—2015 目次 前言 ................................................................................ II 1范围 .............................................................................. 1 2术语和定义 ........................................................................ 1 3样品采集 .......................................................................... 1 4样品处理 .......................................................................... 2 5总RNA提取........................................................................ 2 6RT-PCR ............................................................................ 2 7琼脂糖凝胶电泳 .................................................................... 2 8凝胶成像分析 ...................................................................... 2 附录A（欧亿·体育（中国）有限公司性附录）南方水稻黑条矮缩病病原..........................................3 附录B（规范性附录）TRIzol法提取总RNA技术流程 ..................................... 4 附录C（规范性附录）SRBSDV标准样品RT-PCR电泳图 .................................... 5 I  DB36/ T 885—2015 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由江西省农业厅提出并归口。 本标准起草单位：江西省农业科学院植物保护研究所、江西农业大学农学院。 本标准主要起草人：杨迎青、兰波、李湘民、崔汝强、孙晓棠、魏洪义、蒋军喜、陈洪凡、王广利、 熊艳。 II  DB36/ T 885—2015 南方水稻黑条矮缩病毒RT-PCR检测技术规范 1范围 本标准规定了南方水稻黑条矮缩病毒（Southern rice black-streaked dwarf virus, SRBSDV）的 样品采集、样品处理、总RNA提取、RT-PCR、琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像分析。 本标准适用于水稻疑似病株及白背飞虱样品对SRBSDV的RT-PCR检测。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 引物 primer 指一小段单链DNA或RNA，作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延 伸的出发点而起作用的多核苷酸链。 2.2 退火温度annealing temperature 为引物和模板结合时候的温度参数，当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。 2.3 反转录PCR reverse transcription PCR (RT-PCR) 指一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。 2.4 琼脂糖凝胶电泳agarose gel electrophoresis 指用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。 3样品采集 3.1水稻疑似病株样品采集 田间将疑似病株连根拔起，用吸水纸包住根部，整株带回实验室，保存于4℃冰箱、备用。 3.2灯下白背飞虱样品采集 收集测报灯下的白背飞虱，保存于4℃冰箱、备用。 3.3田间白背飞虱样品采集 1