ICS11.220 B 41 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 2515—2015 猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法 RT-PCR assay for porcine epidemic diarrhea virus 2015-11-10发布 2015-12-10实施 安徽省质量技术监督局发 布   DB34/T 2515—2015 前言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则编写。 本标准由安徽省农业标准化委员会归口。 本标准由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提出。 本标准起草单位：安徽省农业科学院畜牧兽医研究所。 本标准起草人：潘孝成、张丹俊、赵瑞宏、沈学怀、周学利、胡晓苗、戴银、侯宏艳、李贺侠、张 宁、何国荣、周德权、王庆。 I   DB34/T 2515—2015 猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）RT-PCR 检测方法及 其技术要求。 本标准适用于猪肠内容物、粪便以及细胞培养物中 PEDV 核酸的检测。 2缩略语 下列缩略语适用于本文件。 PEDV：猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus） PCR：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction） RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（reverse transcription-polymerase chain reaction） RNA：核糖核酸（ribonucleic acid） DEPC：焦炭酸二乙酯（diethylpyrocarbonate） Taq 酶：Taq DNA 聚合酶（Taq DNA polymerase） dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleoside triphosphate） M-MLV：莫洛尼氏鼠白血病病毒（moloney murine leukemiavirus） PBS：磷酸缓冲液（phosphate buffer solution） TAE：Tris-乙酸电泳缓冲液（tris acetate-EDTA buffer） EB：溴化乙锭（ethidium bromide） 3原理 PEDV 是一种 RNA 病毒。 RNA 反转录产生的 cDNA 可作为 PCR 模板进行扩增。 根据 PEDV 保守基因序列设计一对引物，在 DNA 聚合酶催化下，以母链 DNA 为模板，以引物为延 伸起点，通过变性、退火和延伸，体外复制出与母链模板 DNA 互补的子链 DNA。 4仪器 4.1PCR仪扩增仪。 4.2台式低温高速离心机。 4.3电泳仪。 4.4凝胶成像系统。 4.5冰箱。 4.6微波炉。 4.7分析天平。 1