附件10 食用油中苯并（a）芘的快速检测 胶体金免疫层析法 (KJ201910) 1 范围 本方法规定了食用油中苯并（a）芘的胶体金免疫层析快速检测方法。 本方法适用于食用油中苯并（a）芘的快速测定。 2 原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的苯并（a）芘经提取后与胶体金标记的特异性抗 体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的 变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中苯并（a）芘进行定性判定。 3 试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。 3.1 试剂 3.1.1 正己烷：色谱纯。 3.1.2 乙腈：色谱纯。 3.1.3 二甲基亚砜（DMSO）。 3.1.4 NaH2PO4.2H2O。 3.1.5 Na2HPO4.12H2O。 3.1.6 氯化钠。 3.1.7 吐温-20。 3.1.8 氢氧化钠溶液（2 mol/L）：称取80g氢氧化钠用水溶解，并定容至1L。 3.1.9 PBST溶液：称取0.2965 g NaH2PO4.2H2O、2.9 g Na2HPO4.12H2O、8.76 g氯化钠与0.55 g 吐温-20用水溶解并定容至1 L。 3.2 参考物质 苯并（a）芘参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1， 纯度均≥95%。 表1 苯并（a）芘参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量 苯并（a）芘 Benzo(a)pyrene 50-32-8 C20H12 252.32 注：或等同可溯源物质。 3.3 标准溶液的配制 苯并（a）芘标准储备液（0.1 mg/mL）：精密称取适量苯并（a）芘标准品（3.2），置于10 mL 容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.1 mg/mL的苯并（a）芘标准 储备液；或可直接购买苯并（a）芘标准储备液。0 ℃~5 ℃避光保存备用，有效期1年。 3.4 材料 苯并（a）芘胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为食用油。 3.4.1金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。 3.4.2 试纸条或检测卡。 4 仪器和设备 4.1 移液器：100 μL、1 mL、5 mL和10 mL。 4.2 涡旋混合器。 4.3 离心机：转速≥4000 r/min。 4.4 电子天平：感量为0.01 g。 4.5 氮吹仪或空气吹干仪（带温度控制）。 5 分析步骤 5.1 试样制备 取适量有代表性样品充分混匀。 5.2 试样提取和净化除脂 称取10 g油样于离心管中，加入5 mL 正己烷（3.1.1）和15 mL DMSO（3.1.3）并混合均匀。 漩涡振荡2min，然后4000 r/min离心2 min。弃去上层正己烷层。加入5 mL 正己烷（3.1.1），漩涡 振荡30 s，然后4000 r/min离心30 s。弃去上层正己烷层。加入10 mL 氢氧化钠溶液（2 mol/L）（3.1.8） 和15 mL正己烷（3.1.1），漩涡振荡30s，然后4000 r/min离心30 s。吸取上层正己烷层于15 mL离心 管，4000 r/min离心2 min。取全部正己烷层于氮吹管中，50℃氮吹或空气吹10 min，吹干后加入 200μL DMSO（3.1.3）复溶，混合均匀，此为待测液。 5.3 测定步骤 打开试纸筒，取出所需数量的红色反应微孔（取出微孔后，立即盖好桶盖，以防受潮）。往微 孔中加入200 μL的PBST溶液，再加入50 μL待测液，上下抽吸5~10次至微孔试剂混合均匀， 室温（20℃~25℃）反应7 min。将已做好标记的试纸条插入至上述红色微孔中，使样品垫充分进 入样品中，并计时7 min。从微孔中取出试纸条，弃去试纸条下端的样品垫，进行结果判定。 5.4 质控试验 每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。 5.4.1 空白试验 称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。 5.4.2 加标质控试验 准确称