中华人民共和国国家标准GB5009.276—2016食品安全国家标准食品中葡萄糖酸-δ-内酯的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.276—2016前言本标准代替 /—《肉与肉制品 葡萄糖酸-δ-内酯含量的测定 》GBT9695.17 2008GBT9695.17—2008相比,主要变化如下 :本标准与 /———标准名称修改为 “食品安全国家标准 食品中葡萄糖酸-δ-内酯的测定”;———增加了第一法的检出限 定量限;———修改了5.1中试样制备的方法 ;———增加了“第二法 高效液相色谱法 ”ⅠGB5009.276—2016食品安全国家标准食品中葡萄糖酸 -δ-内酯的测定范围1本标准规定了食品中葡萄糖酸 -δ-内酯含量的测定方法 本标准第一法适用于肉与肉制品 豆制品饮料中葡萄糖酸-δ-内酯的测定,第二法适用于食品中葡萄糖酸-δ-内酯含量的测定 第一法分光光度计法原理2用沸水提取试样中的葡萄糖酸 -δ-内酯,过滤上清液,在氢氧化钾作用下葡萄糖酸-δ-内酯转化成葡萄糖酸盐葡萄糖酸盐通过葡萄糖酸激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶的作用 ,产生5-磷酸核酮糖并使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 (NADP)还原用分光光度计测量还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的吸光度,然后计算出葡萄糖酸-δ-内酯的含量葡萄糖酸激酶→6-磷酸葡萄糖酸盐+二磷酸腺苷葡萄糖酸盐 +腺嘌呤核苷三磷酸6-磷酸葡萄糖脱氢酶6-磷酸葡萄糖酸盐+NADP→5-磷酸核酮糖 +NADPH+CO2+H+试剂和材料3除非另有说明 ,本方法所用试剂均为分析纯 ,水为GBT6682/ 规定的三级水试剂3.1无水乙醇( )CHO2 63.1.13.1.2石油醚:沸程30℃~60℃氢氧化钾(KOH)3.1.33.1.43.1.5双甘氨肽()CHNO4 82 3氯化镁(MgCl2)3.1.6碳酸氢钠(NaHCO3)烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠盐 ()17 33.1.73.1.8CH NNaOP21 277腺嘌呤核苷三磷酸钠盐 ()2 13 3CH NNaO P10 1453.1.9 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 (活力,110U/mg)葡萄糖酸激酶(活力,13U/mg)3.1.10试剂配制3.23.2.1氢氧化钾溶液(2molL/):称取11.22g于50mL小烧杯中,加水溶解后转移至100mL容量瓶,1GB5009.276—2016定容3.2.2缓冲液:分别称取双甘氨肽2.64g和氯化镁0.284g溶于150mL水中,用氢氧化钾溶液调pH至8.0,定容到200mL容量瓶(可在4℃下保存4周)烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐(NADP)溶液(10mgmL/ ):称取烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠3.2.3盐50mg于带盖的小瓶中 ,用5.0mL水溶解(可在4℃下保存4周)腺嘌呤核苷三磷酸 (ATP)溶液(50mgmL/ ):称取腺嘌呤核苷三磷酸钠盐250mg和碳酸氢钠3.2.4250mg于带盖的小瓶中 ,加入5.0mL水溶解(可在4℃下保存4周)3.2.5 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 (6-PGDH)溶液(2.0mgmL/ ):每毫升6-磷酸葡萄糖脱氢酶 (中含有6-PGDH2.0mg,葡萄糖酸激酶和还原型NADP氧化酶不超过0.05%(可在4℃ 下保存6个月))悬液6-PGDH3.2.6葡萄糖酸激酶(GK)溶液(1.0mgmL/):每毫升葡萄糖酸激酶(GK)悬液中含有GK1.0mg,NADP氧化酶含量不超过 0.05%(可在4℃下保存6个月)仪器和设备4紫外可见分光光度计 4.14.2分析天平:感量1mg和0.1mg匀质机4.3分析步骤试样制备55.1肉与肉制品豆制品等固体样品5.1.1取有代表性的样品不少于 200g,用匀质机制成