ICS65.120DB41B 46河南省地方标准DB41/T 1588—2018 饲料中沙门氏菌的检测 EMA-PCR法 2018-04-17发布2018-07-17实施河南省质量技术监督局发 布 DB41/T 1588—2018前言本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草本标准由河南省畜牧局提出并归口本标准起草单位：河南省兽药饲料监察所河南中标检测服务有限公司本标准主要起草人：张发旺方忠意董鹏李金磊李灵平李博于辉本标准参加起草人：高延玲狄元冉韩楠王艳丽贾松涛邱天宝邱富娜王书丽张跃京张宁王小艳王丹I DB41/T 1588—2018饲料中沙门氏菌的检测 EMA-PCR法1范围本标准规定了饲料中沙门氏菌的EMA-PCR检测方法本标准适用于饲料中沙门氏菌的检测2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 13091 饲料中沙门氏菌的检测方法GB/T 14699.1 饲料 采样3原理叠氮溴化乙锭（EMA）能够透过死细菌的细胞膜在强光照射下可与其DNA发生不可逆转的结合使死细菌DNA不能作为模板进行PCR扩增而活菌能进行PCR扩增4试剂和材料4.1除另有规定外试剂为分析纯或生化试剂试验用水符合GB/T 6682一级水的要求4.2缓冲蛋白胨水（BPW）：见附录A的A.14.3氯化镁-孔雀绿增菌液（RV）：见附录A的A.24.42×Premix Taq缓冲液：内含TaqDNA聚合酶1.25U/25μL4mmol Mg dNTP各0.4mmol2+4.5特异性引物(对) 序列为：a）上游引物：5＇- GTG AAA TTA TCG CCA CGT TCG GG -3＇；b）下游引物：5＇- CAT CGC ACC GTC AAA GGA AC -3＇4.6琼脂糖：电泳级4.7Marker 20004.8沙门氏菌ATCC 140284.950×TAE缓冲液：见附录A的A.34.106×上样缓冲液：见附录A的A.44.11叠氮溴化乙锭（EMA0.2mg/mL）：见附录 A的A.54.12溴化乙锭（10mg/mL）4.13灭菌离心管：1.5mL15mL5仪器设备1