水稻茎线虫检疫鉴定方法MethodsforquarantineandidentificationofDitylenchusangustus(Butler)FilipjevSN／T112002前言本标准的附录B和附录C为规范性附录，附录A为欧亿·体育（中国）有限公司性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、南京农业大学。本标准主要起草人：戚龙君、宋绍秫、林茂松。本标准系首次发布的检验检疫欧亿·体育（中国）有限公司标准。1范围本标准规定了对水稻茎线虫检疫和鉴定方法。本标准适用于稻种以及稻草、稻草编织成的袋、绳、席等包装物中水稻茎线虫的检疫和鉴定。2原理水稻茎线虫Rice)，侧尾腺纲(Sstecemneemnatetaode，学名：Di)，垫刃目(Ttylelencnhchiduasangustus(B)，粒线虫科(Anguiniutler，19da1e3)Filip)，茎线虫属jev，属于线虫门(N(Deimtaytlaeernynchus)。其外寄生于水稻，生殖只能在稻株内进行，主要寄居于花梗的基部、茎杆末节以上以及颖片之内，这些地方大多有包括卵到成虫各个阶段的大量线虫。水稻受害后叶面出现浅绿色斑点，叶缘卷缩，叶尖弯曲，整张叶片扭曲或呈畸形，严重时花穗捻转或包在叶鞘内不能抽出，小穗不孕，形成空粒。本病主要由稻种内潜伏的线虫作远距离传播，通过引种传带到新稻区，还可通过罹病的稻草作远距离传播。土壤中残留的线虫以及带线虫的病稻草、稻茬、种子或混在种子里的病残碎片为当地次年发病的主要来源。它的侵染循环、传播途径、寄主范围(参见附录A)、生物学和形态学特征是该检疫鉴定方法的依据。3仪器、用具333333333333............1生物显微镜2体视显微镜3冰箱；(100倍～1000倍，具有目镜测微尺或者绘图仪、监视器等)；(10倍～90倍，具透射光源)；4凹玻片；5试管；6载玻片；7盖玻片；8加热板(80℃以下)；L、1000mL)；9烧杯(500m1110漏斗；1漏斗架；2研钵； 33333333333...........111111122223培养皿；4剪刀；5挑针；6干燥器；7打空器；8酒精灯；9乳胶管；0纱布；1止水夹；2指形管；3玻璃纤维丝(3mm～5mmm)。4药品4444....1指甲油；F固定液2TA(40％甲醛7L、三乙醇胺2mL和蒸馏水91mL混合而成)；3乳酚油(苯酚20mL、乳酸20mL、甘油40mL和蒸馏水20mL混合而成)；4石蜡。5现场检疫55..1抽样1.1抽样方法棋盘式、五点式或随机抽样。55..11..2抽样数量2.1稻种按总件数的5％～20％抽样，最低抽检10件。取样的数量为：10005kg余量计取kg以下取2kg；kg：g增取kg。110kg，不足kg～10kg～5050k0000g取04kg；kg取kg余量计取1k20g；g；1kg～051000kkg～1g取16014g以上，每增加kg；50kg取1kg～kg：10010000kg取8g～kg：10001kkg每增加g～20kg取102011250000001kkg增取10000kg，不足000k2k11000k50025000025..2.2稻草及其编织品按总件数的5％～0根；1根～样品，不足5000根的余量计取五根样品。200％抽样，每次检查不得少于10件且不少于500根。取样的数量为：50根以下取五根：00511根以上，每增加5000根增取五根根～200根取121000根取15根；1001根～5000根取20根；555..2外观症状的检查1水稻种子的检查2. 首先要注意检查褐色畸形种子，其次要看稻种内是否混有稻草或其他水稻残体，同时注意是否夹带泥土等，收集后与采集的样品一并送实验室进行检查。5.2.2稻草及其编织品的检查注意检查叶鞘颜色异常、叶缘卷缩、叶尖弯曲、整张叶片扭曲或呈畸形、草杆短小的稻草及其编织品。收集上述可疑植物材料及所夹带的土壤等与采集的样品一并带回实验室检验。6实验室检验66..1稻种检验方法1.1抽样所得种子，可将稻种去壳，利用漏斗法(按附录B)分离颖壳中可能带有的线虫。分离所得的线虫制成(制作方法按附录C)，在显微镜下观察，并根据形态鉴定特征进一步鉴定。临时玻片6.1.2对于畸形、不饱满的种子，可直接在体视显微镜下解剖，检查有无线虫。如有线虫，制成临时玻片，在显微镜下观察，并根据形态鉴定特征进一步鉴定。666...2稻草及其编织品检验方法22..1将采得的样品适当处理成小段，用漏斗法分离。2收集所分离的线虫，在体视显微镜下观察，并挑取若干条线虫至载玻片上，制成临时玻片，在显微镜下观察，并根据形态鉴定特征进一步鉴定。7形态鉴定特征7.1茎线虫属鉴别特征雌虫：一般不肥大，不弯成螺旋形，长0．6mm～1.5mm，有的可达2mm；表皮有很细的环纹，侧区有四条至六条刻线；口针细小，多数长度为7μm～11μm；中食道球有或无瓣，偶尔无明显的中食道球，峡部与后食道腺之间无缢缩，后食道腺短或长，不覆盖、短覆盖或长覆盖肠；单生殖腺、前伸，卵巢短或长，有时伸达食道区或转折，卵母细胞一行至二行排列，子宫柱状部有四排细胞(每排四个细胞)，后阴子宫囊有或无。雄虫：精巢不转折，精细胞