NY中华人民共和国农业欧亿·体育（中国）有限公司标准NY/T1103.3—2006转基因植物及其产品食用安全检测抗营养素第3部分：硫代葡萄糖苷的测定Safety assessment of genetically modified plant and derived products Part 3: assay of anti-nutrients glycosinolate2006-07-10发布2006-10-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T1103.3—2006前言本标准附录A为欧亿·体育（中国）有限公司性附录，附录B为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、农业部科技发展中心、中国农业大学、天津市卫生防病中心。本标准主要起草人：李培武、杨月欣、丁小霞、韩军花、张文、李宁、汪其怀、黄昆仑、刘克明、刘培磊、连庆。本标准首次发布。 NY/T1103.3—2006转基因植物及其产品食用安全检测抗营养素第3部分：硫代葡萄糖苷的测定1范围本标准规定了转基因油菜籽及其产品中硫代葡萄糖苷的高效液相色谱测定方法。本标准适用于转基因油菜籽及其产品中硫代葡萄糖苷的高效液相色谱测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T 14488.1油料种籽含油量测定法GB/T 14489.1油料水分及挥发物含量测定法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1转基因油菜籽genetically modified rapeseed指利用基因工程技术改变基因组构成，用于农业生产或者农产品加工的油菜籽。3.23.3转基因油菜籽产品products derived from genetically modified rapeseed指转基因油菜籽的直接加工产品和含有转基因油菜籽的产品。相对校正系数response factors待测硫代葡萄糖苷的摩尔吸光系数与内标的摩尔吸光系数的相对比值。4原理 NY/T1103.3—2006用70% 甲醇水溶液提取硫代葡萄糖苷，然后在阴离子交换树脂上纯化，并酶解脱去硫酸根，反相色谱柱分离，紫外检测器检测硫代葡萄糖苷。5试验材料转基因油菜籽及其产品、受体油菜籽及其产品。如果对转基因油菜籽产品中的硫代葡萄糖苷进行测定，转基因油菜籽产品和受体油菜籽产品的处理条件应相同。上述材料的水分含量和种植环境应基本一致。6试剂除非另有说明，仅使用分析纯试剂；水为蒸馏水。6.1硫酸酯酶溶液：Helix pomatia H1 型（EC 3.1.6.1），每毫升硫酸酯酶溶液的活性单位不低于0.5，硫酸酯酶溶液应即配即用。6.2葡聚糖凝胶悬浮液：称取10 g DEAE Sephadex A 25葡聚糖凝胶，浸泡在过量的2 mol/L醋酸溶液中，静置沉淀，再加入 2 mol/L 醋酸溶液，直到液体体积是沉淀体积的 2 倍，于 4℃冰箱中存放，待用。6.370%甲醇溶液：取70 mL甲醇，加水定容至100mL。6.40.02 mol/L醋酸钠溶液：称取0.272 g醋酸钠（CH3COONa·3H2O），加入800mL水溶解，用醋酸调节溶液的pH值至4.0，加水定容至1L。6.56 mol/L甲酸咪唑溶液：称取204g咪唑，溶解于113 mL甲酸中，待溶液冷却后加水定容至500 mL。6.6内标：用丙烯基硫代葡萄糖苷（Mr=415.49）作内标，当样品中含有丙烯基硫代葡萄糖苷时，用苯甲基硫代葡萄糖苷（Mr=447.52）作内标。对硫代葡萄糖苷含量低于 20.0 μmol/g的样品，可将下述6.6.1至6.6.4中的内标溶液浓度降为1 mmol/L至3mmol/L。内标溶液在4℃的冰箱中可存放三周，在-18℃条件下可保存更长时间，内标溶液的纯度检定见附录A。6.6.15 mmol/L丙烯基硫代葡萄糖苷溶液：称取207.7 mg丙烯基硫代葡萄糖苷溶解于80mL水中，加水定容至100 mL。6.6.220mmol/L丙烯基硫代葡萄糖苷溶液：称取831.0mg丙烯基硫代葡萄糖苷溶解于80mL水中，加水定容至100 mL。6.6.35 mmol/L苯甲基硫代葡萄糖苷溶液：称取223.7 mg苯甲基硫代葡萄糖苷溶解于80mL水中，加水定容至100 mL。6.6.420mmol/L苯甲基硫代葡萄糖苷溶液：称取895.0mg苯甲基硫代葡萄糖苷溶解于80mL水中，加水定容至100 mL。 NY/T1103.3—20066.7流动相A：超声波脱气30s的水。6.8流动相B：取200mL色谱级乙腈，加入800mL水，浑匀，超声波脱气30s。7仪器和设备7.1通常实验室仪器设备。7.2研钵或微型研磨机。7.3聚丙烯离子交换微柱：底部筛板为100目。7.4离心机：带有10 mL转头，并能获得5000g的相对离心力。7.50.45 μm水溶性微孔滤膜。7.6色谱柱：填料颗粒小于或等于10μm的反相 C18或C8柱，例如：NovapakC18柱，5 μm（150mm×3.9 mm）；Lichrosorb Rp18柱，5 μm（150 mm×4.6 mm）；Spherisorb C18柱，10 μm（150mm×4 mm）；Lichrospher Rp8柱，5 μm（125 mm×4 mm）。7.7高效液相色谱仪：具备梯度洗脱，柱温可控制在30℃，带紫外检测器。8试样的制备按照 GB 5491 的规定对试验材料进行缩分，将缩分后的试验材料分成三等份。第一份按GB/T 14489.1的规定测定水分及挥发物含量，第二份按GB/T 14488.1的规定测定含油量，第三份为硫代葡萄糖苷待测试样。如果试验材料的水分及挥发物含量超过 10%，应在 45℃条件下通风干燥，并将干燥后的待测试样在微型粉碎机中粉碎，过40目筛，然后立即连续完成9.1和9.2。9操作步骤9.1称样分别