中华人民共和国国家标准GB 5413.37—2010食品安全国家标准 乳和乳制品中黄曲霉毒素 M1的测定National food safety standard Determination of aflatoxin M1 in milk and milk products 2010-03-26发布2010-06-01实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布 GB5413.37—2010前言本标准第一法对应于ISO14501：2007Milkandmilkpowder-determination ofaflatoxinM1content-clean-up by immunoaffinity chromatography and determination by high-performance liquid chromatography，本标准第一法与ISO14501：2007的一致性程度为非等效；本标准第二法和第三法代替GB/T 18980-2003；本标准第四法来自于NY/T 1664-2008《牛乳中黄曲霉毒素M1的快速检测 双流向酶联免疫法》。本标准附录A和附录B为欧亿·体育（中国）有限公司性附录。I? GB5413.37—2010食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素 M1的测定1 范围本标准规定了乳和乳制品中黄曲霉毒素 M1的测定方法。标准第一法适用于乳和乳制品中黄曲霉毒素 M1的测定；第二法适用于乳、乳粉，以及低脂乳、脱脂乳、低脂乳粉和脱脂乳粉中黄曲霉毒素 M1的测定；第三法适用于乳和乳粉中黄曲霉毒素M1的测定；第四法适用于液态乳和乳粉中黄曲霉毒素 M1的测定。2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。第一法免疫亲和层析净化 液相色谱—串联质谱法3 原理试样液体或固体试样提取液经均质、超声提取、离心，取上清液经免疫亲和柱净化，洗脱液经氮气吹干，定容，微孔滤膜过滤，经液相色谱分离，电喷雾离子源离子化，多反应离子监测（MRM）方式检测。基质加标外标法定量。4 试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的一级水。4.1甲酸（HCOOH）。4.2乙腈 (CH3CN)：色谱纯。4.3石油醚（CnH2n+2）：沸程为30℃～60℃。4.4三氯甲烷（CHCl3）。4.5氮气：纯度≥99.9%。4.6黄曲霉毒素M1标准样品：纯度≥98%。4.7乙腈-水溶液(1+4)：在400mL水中加入100 mL乙腈。4.8乙腈-水溶液(1+9)：在450mL水中加入50 mL乙腈。4.90.1 % 甲酸水溶液：吸取1 mL 甲酸（4.1），用水稀释至1000 mL。4.10 乙腈-甲醇溶液（50+50）：在500mL乙腈中加入500 mL甲醇。4.11 氢氧化钠溶液（0.5mol/L）：称取2 g氢氧化钠溶解于100 mL水中。1 GB5413.37—20104.12空白基质溶液分别称取与待测样品基质相同的、不含所测黄曲霉毒素的阴性试样8份于100 mL烧杯中。以下操作按6.1试液提取和6.2 净化步骤进行。合并所得8份试样的纯化液，用 0.22μm微孔滤膜的一次性滤头（5.23）过滤。弃去前0.5 mL滤液，接取少量滤液供液相色谱－质谱联用仪检测。获得色谱－质谱图后，对照附录 A中的图A.2，在相应的保留时间处，应不含黄曲霉毒素 M1。剩余滤液转移至棕色瓶中，在-20℃电冰箱内保存，供配制标准系列溶液使用。4.13 黄曲霉毒素M1标准储备溶液：分别称取标准品黄曲霉毒素M1 0.10mg（精确至0.01 mg），用三氯甲烷（4.4）溶解定容至10 mL。此标准溶液浓度为0.01 mg/mL。溶液转移至棕色玻璃瓶中后，在-20℃电冰箱内保存，备用。4.14 黄曲霉毒素M1标准系列溶液：吸取黄曲霉毒素M1 标准储备溶液（4.13）10 μL于10 mL容量瓶中，用氮气将三氯甲烷吹至近干，空白基质溶液（4.12）定容至刻度，所得浓度为10 ng/mL的M1标准中间溶液。再用空白基质溶液（4.12）将黄曲霉毒素M1标准中间溶液稀释为0.5 ng/mL、0.8 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、4.0 ng/mL、6.0 ng/mL、8.0 ng/mL的系列标准工作液。5 仪器和设备5.1液相色谱-质谱联用仪，带电喷雾离子源。5.2色谱柱：ACQUITYUPLCHSS T3 ，柱长100 mm，柱内径2.1 mm；填料粒径1.8 μm，或同等性1能的色谱柱。5.3天平：感量为0.001g和0.00001 g。5.4匀浆器。5.5超声波清洗器。5.6离心机：转速≥6000转/分钟。5.750 mL具塞PVC离心管。5.8水浴:温控30℃士2℃，50℃士2℃，温度范围25℃～60℃。5.9容量瓶:100mL。5.10 玻璃烧杯:250mL，50 mL。5.11 带刻度的磨口玻璃试管:5mL，10 mL，20 mL。5.12 移液管:1.0mL，2.0 mL和50.0 mL。5.13玻璃棒。5.14 10目圆孔筛。5.15 250 mL分液漏斗。5.16 100 mL圆底烧瓶。5.17旋转蒸发仪。1给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。2 GB5413.37—20105.18 pH计：精度为0.01。5.19 250 mL具塞锥形瓶。5.20 免疫亲和柱：针筒式 3 mL。5.21 10 mL和50 mL一次性注射器。5.22固相萃取装置（带真空系统）。5.23 一次性微孔滤头：带0.22 μm微孔滤膜（水相系）。6 分析步骤6.1试液提取6.1.1乳：称取50 g(精确至0.01 g)混匀的试样，置于50mL具塞离心管(5.7)中，在水浴(5.8) 中加热到35℃～37℃。在6000 转/分钟下离心15min。收集全部上清