中华人民共和国国家标准畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量测定方法(高效液相色谱法)GB/T 14931.1-94Method for determination of oxytetracyline tetracyline andchlortetracycline residues in meat (HPLC)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1主题内容与适用范围本标准规定了畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的检测方法。本标准适用于各种食用畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定。最低检出浓度为：0.15，0.20, 0.65mg/kg。2原理样品经提取，微孔滤膜过滤后直接进样，用反相色谱分离，紫外检测器检测，与标准比较定量，出峰顺序为土霉素、四环素、金霉素。标准加法定量。3试剂3.1乙腈(分析纯)。3.20.01 mol/L磷酸二氢钠溶液：称取1.56 g(±0.01g)磷酸二氢钠(NaH2PH4.2H2O)溶于蒸馏水中，定容到 100 mL，经微孔滤膜(0.45 μm)过滤，备用。3.3土霉素(OTC)标准溶液：称取土霉素 0.0100g(±0.0001g)，用 0.1mol/L盐酸溶液每毫升含土霉素 1mg。3.4四环素(TC)标准溶液：称取四环素 0.0100g(±0.001g)，用 0.01 mol/L盐酸溶液溶解并定容 10.00 mL，此溶液每毫升含四环素 1mg。3.5金霉素(CTC)标准溶液：称取金霉素 0.0100g(±0.0001g),溶于蒸馏水并定容成 10.00mL，此溶液每毫升含金霉素 1mg。以上标准品均按 1000单位/mg折算。3.3～3.5溶液应于4℃以下保存，可使用1周。3.6混合标准溶液：取 3.3、3.4标准溶液各1.00 mL，取 3.5标准溶液2.00 mL，置于10mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四环素各 0.1mg，金霉素 0.2mg，临时现配。3.75％高氯酸溶液。4仪器4.1高效液相色谱仪(HPLC)：具紫外检测器。5色谱条件5.1柱：ODS-C18 (5 μm)6.2mm×15 cm。5.2检测波长：355 nm。5.3灵敏度：0.002 AUFS。5.4柱温：室温。5.5流速：1.0mL/min。5.6进样量：10 μL。5.7流动相：乙腈/0.01 mol/L磷酸二氢钠溶液(用30％(V/V)硝酸溶液调节 pH2.5),35:65(V/V)，使用前用超声波脱气 10 min。6操作方法6.1样品测定：称取 5.00 g(±0.01 g)切碎的肉样(＜5 mm)，置于 50 mL锥形烧瓶中，加入 5％高氯酸 25.0mL，于振荡器上振荡提取 10 min，移入到离心管中，以 2000 r/min离心3min,取上清液经 0.45μm滤膜过滤,取溶液 10μL进样, 记录峰高，从工作曲线上查得含量。 6.2工作曲线，分别称取 7份切碎的肉样，每份5.00 g(±0.01g)，分别加入混合标准溶液 0、25、50、100、150、200、250 μL(含土霉素、四环素各为0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 μg, 含金霉素 0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0 μg), 按6.1方法操作、以峰高为纵坐标, 以抗生素含量为横坐标,绘制工作曲线。6.3计算A×1000X =━━━━━m×1000式中: X——样品中抗生素含量, mg/kg;A——样品溶液测得抗生素质量, μg;m——样品质量, g。━━━━━━━━━━━附加说明:本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由辽宁省食品卫生监督检验所、大连卫生检疫所、沈阳市卫生防疫站、辽宁省卫生职工医学院负责起草。本标准主要起草人翟永信、阎勇、卫锋、吴伯禄、马勇。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生食品部食品卫生监督检验所负责解释。━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━中华人民共和国卫生部 1994-01-24批准1994-08-01实施