ICS07.100.30C 53DB22备案号：35808-2013吉林省地方标准 DB 22/T 1675—2012 蔬菜中单核细胞增生李斯特菌微生物分子分型 PFGE法 Molecular subtyping of monocytogenes Listeria in vegetables——PFGE 2012-12-17发布2013-01-01实施吉林省质量技术监督局发 布 DB22/T 1675—2012前言本标准按照GB/T 1.1-2009 和GB/T 20001.4-2001 给出的规则起草。本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心。本标准主要起草人：刘韬、赵庆松、丁旭、吴连鹏、王宁、曲辉、史晓丽、刘金华、牛茜、罗雁非。I DB22/T 1675—2012蔬菜中单核细胞增生李斯特菌微生物分子分型PFGE法1范围本标准规定了蔬菜中单核细胞增生李斯特菌微生物分子分型的PFGE方法。本标准适用于蔬菜中单核细胞增生李斯特氏菌生物分子分型。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修订单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB 19489实验室生物安全通用要求3缩略语下列定义和缩略语适用于本文件。PFGE：脉冲场凝胶电泳（Pulsed Field Gel Electrophoresis）Tris：三（羟甲基）氨基甲烷（tris (hydroxymethyl) aminomethane）EDTA：乙二胺四乙酸（Ethylene diamine tetraacetic acid）TE buffer：Tris: EDTA缓冲液（Tris: EDTA buffer）SDS：十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate）SKG：Seakem 金琼脂（Seakem Gold）4试剂与材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。4.1水：为符合GB/T 6682的灭菌二级水。4.2Half-Fraser培养基：见附录A.1。4.3Fraser肉汤：见附录A.2。4.4牛津琼脂（Oxford琼脂）：见附录A.3。4.5ALOA琼脂：见附录A.4。4.6胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤(TSB-YE) ：见附录A.5。4.7胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-YE) ：见附录A.6。4.8糖类利用肉汤（鼠李糖和木糖）：见附录A.7。4.9动力试验琼脂：见附录A.8。4.10CAMP（Christle，Atkins，Munch-Petersen）培养基及试验菌株：见附录A.9。4.11蛋白酶K（Proteinase K）储液见附录A.10。4.12Tris:EDTA (TE) Buffer见附录A.11。4.13十二烷基磺酸钠（SDS）。4.14SeaKem Gold Agarose。4.15限制性内切酶Asc Ⅰ。1