ICS 65.120 B 46 DB43 湖 南省地方标准 DB43/T889—2014 饲料中巴氯芬的测定 高效液相色谱法 Determination of Baclofen in feeds High performance liquid chromatographic method 2014-06-10发布 2014-08-10实施 湖南省质量技术监督局 发布  DB43/T 889—2014 目 次 前言……………………………………………………………………………………………………Ⅱ 范围…………………………………………………………………………………………………1 1 2规范性引用文件………………………………………………………………………………………1 3原理……………………………………………………………………………………………………1 4 5 6 试剂与材料…………………………………………………………………………………………1 仪器与设备…………………………………………………………………………………………2 采样与试样的制备…………………………………………………………………………………2 7分析步骤………………………………………………………………………………………………2 8结果计算………………………………………………………………………………………………3 9灵敏度、准确度、精密度………………………………………………………………………………3 附录A（欧亿·体育（中国）有限公司性附录）饲料中巴氯芬高效液相色谱图…………………………………………………4 I  DB43/T 889—2014 前 言 本标准按GB/T 1.1-2009的规则编制。 本标准由湖南省畜牧水产局提出并归口。 本标准起草单位：湖南省兽药饲料监察所。 本标准主要起草人：易建希、武深树、陈福华、胡保国、肖安东、隆雪明、欧阳龙、魏群、何红艳、 邓昉、周宇骏。 II  DB43/T 889—2014 饲料中巴氯芬的测定高效液相色谱法 1范围 本标准规定了饲料中巴氯芬高效液相色谱的测定方法。 本标准适用于我省配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中巴氯芬的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适应于本文件； 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1饲料采样 GB/T 20195动物 饲料试样的制备 3原理 采用稀酸溶液提取试样中含有的巴氯芬，混合型阳离子固相萃取柱净化，氨化甲醇溶液洗脱，高效 液相色谱法紫外测定，外标法定量。 4试剂与材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇色谱纯。 4.2乙腈色谱纯。 4.3磷酸色谱纯。 4.4偏磷酸。 4.5氨水。 4.6偏磷酸溶液：称取14.29g偏磷酸用水溶解，并稀释至1L。 4.7流动相：1mL磷酸用水稀释至1L，并按89：11的比例和乙睛混合，用前超声脱气5min。 4.8氨水-甲醇溶液：将4mL氨水与96mL甲醇混合均匀，即得。 4.9标准品：巴氯芬，纯度≥98%。 4.10标准储备液的配制：精确称取巴氯芬标准品10mg（精确到 0.00001g），加适量甲醇超声溶解 并用甲醇定容于50mL容量瓶中。配制成浓度为0.2mg/mL的标准储备液。4℃以下避光可保存3个月。 4.11标准工作曲线的配制：准确移取适量巴氯芬标准储备液，用流动相配成0.05μg/mL、0.10μg/mL、 0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、5.00μg/mL的标准工作曲线，现配现用。 4.12微孔滤膜：0.22μm，有机膜。 4.13混合型阳离子固相萃取柱：MCX（60 mg/3 mL），或相当者。 1  DB43/T 889—2014 5仪器与设备 5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2分析天平：感量 0.000 01g和0.001 g。 5.3固相萃取装置。 5.4旋涡混匀器。 5.5离心机：转速≥8000r/min。 5.6超声波清洗机。 5.7恒温振荡器。 5.8氮吹仪。 6采样与试样的制备 6.1采样按GB/T 14699.1的规定执行。 6.2试样制备按GB/T 20195的规定执行。 7分析步骤 7.1提取 称取试样2g（精确到0.001g）,置于100mL具塞锥形瓶中,准确加入50.00mL偏磷酸溶液，室温 下超声提取10min，振荡摇床120r/min，振荡20min。静置分层，取上清液30mL,8000r/min离心5min， 取上清液供固相萃取净化。 7.2净化 将固相萃取柱依次用 5mL甲醇、5mL水活化，准确移取 5.00mL上述提取液过柱，分别用5mL水、 5mL甲醇淋洗固相萃取柱，真空抽干。5mL氨水-甲醇溶液洗脱，收集全部洗脱液。整个固相萃取过程流 速控制在1mL/min。洗脱液于50℃下氮气吹干，准确移取1.00mL流动相溶解残留物，涡旋混合1min， 过微孔滤膜后，供高效液相色谱分析。 7.3测定 7.3.1高效液相色谱条件 色谱柱：C18柱 (250×4.6 mm，5μm)，或相当者。 流速：1.0mL/min。 进样量：20μL。 柱温：35℃。 检测波长：220nm。 7.3.2高效液相色谱测定 取试样溶液和相应的标准工作溶液，作单点或者多点校准，以色谱图保留时间定性、峰面积积分值 定量。标准工作液及试样液中巴氯芬的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。饲料中巴氯芬高效液相 色谱图参见附录A，巴氯芬标准溶液高效液相色谱图参见附录A中图A.1、巴氯芬空白添加试样溶液高 2