ICS01.040.67 X 60 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 2560—2015 窖泥微生物群落结构快速定量测定 PSP-qPCR绝对定量法 Quickly detection methed to quantify pits mud microbial communities PSP-absolute qPCR method 2015-12-30发布 2016-01-30实施 安徽省质量技术监督局发 布   DB34/T 2560—2015 前言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省浓香型白酒标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位：安徽瑞思威尔科技有限公司、安徽古井贡酒股份有限公司、哈尔滨工业大学。 本标准起草人：何宏魁、周庆伍、李安军、刘国英、余秀娟、汤有宏、葛向阳、张会敏、蒋军、聂 加燕。 I   DB34/T 2560—2015 窖泥微生物群落结构快速定量测定PSP-qPCR绝对定量法 1范围 本标准规定了一种基于门特异性引物测定窖泥微生物群落结构组成的快速定量优化方法。 本标准适用于窖泥中微生物群落结构的快速定量检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 门特异性引物phylum-specific primers，PSP 指特异性扩增某个门的所有微生物基因序列所共有且相对于其余门的微生物基因序列所独有的基 因序列的引物对，由一条正向引物（5’→3’）和一条反向引物（3’→5’)组成。 3.2 荧光定量PCRquantitative PCR，qPCR 又称 real-time PCR，荧光反转录-聚合酶链反应。 3.3 Ct值cyclethreshold value 指 PCR 反应体系中目标 DNA 浓度达到人为确定的阈值时的 PCR 循环次数。 3.4 TA克隆TA Clone 是一种亚克隆方式，在连接酶存在的情况下，依赖DNA链两端的腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）的互 补作用，将不同 DNA 链连接。 4原理 1