ICS65.120 DB13 B 46 河北省地方标准 DB13/T 1384.1—2011 饲料中4种β－内酰胺类药物的测定 Determination of four kinds of β-lactams in feed 2011-05-10发布 2011-05-20实施 河北省质量技术监督局发 布  DB13/T 1384.1—2011 前言 本标准按照GB/T 1.1－2009给出的规则起草。 本标准由河北省质量技术监督局提出。 本标准起草单位：河北大学、河北省食品质量监督检验研究院、河北医科大学、北京出入境检验检 疫局技术中心、石家庄市疾病预防控制中心、河北省饲料产品质量监督检验站。 本标准主要起草人：张岩、李挥、吕品、丛斌、卢晓宇、张敬轩、沈磊、米振杰、贾茜、张宏、杨 立学、李志平、高振同、武英利。 I  DB13/T 1384.1—2011 饲料中4种β－内酰胺类药物的测定 1范围 本标准规定了饲料中青霉素 G、青霉素 V、氨苄西林、阿莫西林 4种β-内酰胺类药物的液相色谱- 串联质谱测定方法。 本标准适用于饲料中青霉素 G、青霉素 V、氨苄西林、阿莫西林的测定。 本标准的方法检出限：青霉素G、青霉素V为1.0μg/kg；氨苄西林、阿莫西林为2.0 μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。 3原理 试样中的 4种β-内酰胺类药物残留，用 Oasis HLB或相当的固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱 仪测定，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2乙腈：色谱纯。 4.3乙酸：优级纯。 4.4乙腈+水（1＋3）：量取25mL乙腈与75 mL水混匀。 4.5 Oasis HLB固相萃取柱或相当者：500 mg，6 mL。使用前分别用5 mL甲醇和10mL水预处理， 保持柱体湿润。 4.6青霉素 G、青霉素 V、氨苄西林、阿莫西林：纯度≥99％。 4.7青霉素 G、青霉素 V、氨苄西林、阿莫西林标准储备溶液：准确称取适量的每种标准物质，分别 用乙腈配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备溶液。储备液贮存在-18℃冰柜中。 4.8青霉素 G、青霉素 V、氨苄西林、阿莫西林标准工作溶液：根据需要吸取适量青霉素 G、青霉素 V、氨苄西林、阿莫西林标准储备溶液，用空白样品稀释成适当浓度的基质混合标准工作溶液。 5仪器 5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2分析天平：感量0.1 mg和0.01g。 1  DB13/T 1384.1—2011 5.3漩涡混匀器。 5.4固相萃取真空装置。 5.5微量进样器：25μL，100 μL。 5.6刻度样品管：5mL，精度为0.1 mL。 5.7真空泵：真空度应达到80 kPa。 5.8 pH计：测量精度0.01。 5.9氮吹仪。 5.10高速离心机。 6测定步骤 6.1试样溶液的制备 称取5g试样（精确到0.01 g）置于100mL离心管中，加人45 mL去离子水，于漩涡混匀器上快 速混合5min，以5 000r/min离心10 min，将上清液移至 Oasis HLB柱中，以小于或等于3 mL/min的 流速通过固相萃取柱后，用5mL水洗柱，弃去全部流出液。在65 kPa的负压下，减压抽干20 min，最 后用3mL甲醇洗脱，收集洗脱液于刻度样品管中，于40℃水浴中用氮吹仪吹干，用乙腈定容至1mL， 摇匀后，供液相色谱-串联质谱仪测定。 6.2测定 6.2.1液相色谱条件 色谱柱：SunFireTM C18 3.5 μm，150 mm×2.1 mm或相当者。 流动相及流速见表1。 柱温：30℃。 进样量：20 μL。 表1液相色谱梯度洗脱条件 时间/min 0.00 流速/（μL /min） 水（含0.4％乙酸）/（％） 乙腈/（％） 40. 0 200 200 200 200 60.0 35.0 60.0 60.0 15.00 15.01 25.01 65. 0 40. 0 40. 0 6.2.2质谱条件 离子源：电喷雾离子源（ESI）。 扫描方式：正离子扫描。 检测方式：多反应监测。 定性离子对、定量离子对，见表2。 其余质谱条件见附录 A。 2  DB13/T 1384.1—2011 表2定性离子对与定量离子对 青霉素G 青霉素V 氨苄西林 阿莫西林 定性离子对 335/160 335/176 351/160 351/192 350/192 350/160 366/114 366/208 （m/z） 定量离子对 335/160 351/160 350/160 366/208 （m/z） 6.2.3液相色谱－串联质谱测定 6.2.3.1定性测定 在相同试验条件下，样品中待测物质与基质标准溶液中对应物质的保留时间偏差在±2.5％之内； 样品色谱图中各定性离子对相对丰度与浓度接近的基质标准溶液的色谱图中离子相对丰度相比，若偏差 不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在该残留。 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞50 ±20 ＞20～50 ±25 ＞10～20 ±30 ≤10 ±50 允许的最大偏差 6.2.3.2定量测定 在仪器最佳工作条件下，用青霉素 G、青霉素 V、氨苄西林、阿莫西林标准储备溶液配成的基质混 合标准溶液分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准 工作曲线对样品进行定量，样品溶液中青霉素 G、青霉素 V、氨苄西林、阿莫西林的响应值均应在仪器 测定的线性范围内。 在上述色谱条件下，青霉素 G、青霉素 V、氨苄西林、阿莫西林的总离子流图与保留时间见附录 B。 6.3平行试验 按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。 6.4空白试验 除不称取试样外均按上述分析步骤进行。 7结果计算 从标准工作曲线上得到试样中相应的 β-内酰胺类药物浓度后，结果按公式(1)计算： X