DB32 江苏省地方标准 ICS 65.020.20 B 31 DB32/T 3652-2019 铁皮石斛嫩茎液体培育生产技术规程 T echnical regulation of the c ultivation for tender stems of Dendrobium officinale in submerged culture 201 9 - 09 - 19 发布 201 9 - 10 - 31 实施 江苏省市场监督管理局 发布  前 言 本标准按 GB/T 1.1 - 200 9 《标准化工作导则 第 1 部分 ： 标准的结构 与编写规则》 给出的规则 编写。 本标准由江苏省农业科学院提出 并归口 。 本标准起草单位： 苏州天成新农生物科技有限公司， 江苏省农业科学院。 本标准起草人：张杰、周燕群、关剑、余向阳、杜平、王昕怡、吴红升。  铁皮石斛嫩茎液体培育生产技术规程 1 范围 本标准规定了铁皮石斛嫩茎液体培育的术语和定义、生产条件、种源培育、培育生产、规模化生 产、日常管理、采收、质量等划分和包装、运输及贮存。 本标准适用于铁皮石斛嫩茎液体培育。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期引 用文件，仅所注日期版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本 文件。 3.1 铁皮石斛嫩茎液体培育（The cultivation for tender stems of Dendrobium officinale in submerged culture） 从铁皮石斛中分离植物愈伤组织，经诱导分化及驯化筛选，利用 离体培养 生物 技术 扩增培育 的无 农药残留、重金属含量 较 低、高醇 浸出物含量 铁皮石斛幼嫩茎 的培育技术 。 4 生产条件 室内环境为十万级以上洁净度的洁净间。 保持室温 25 o C ~ 28 o C 。均匀柔和人工光，增补 4:1 红蓝 光，光照强度为 2 00 0Lux ，光暗周期 8h:16h 。空气相对湿度 40%~70% 。 生产环境、生产用水和过滤水 应分别符合 GB 5749 和 GB/T 6682 的规定 。 5种源培育与增殖 5.1培养基配制 采用 MS 培养基 + 0.5 mg /L NAA+0.5mg/L KT +20 g/L 葡萄糖 + 10 g /L 琼脂 固体培养基进行种源细胞固 体培养。采用 MS 培养基 + 0.5 mg /L NAA+0.5mg/L KT +20g/L 葡萄糖培养液进行种源 细胞液体 培养 。 5.2种源细胞增殖  将成熟铁皮石斛茎段插入 固体 培养基中培养，获得愈伤组织细胞。在相同 固体 培养基条件下 增殖 种源细胞 。 5 . 3 种源细胞 培育 按照鲜重 20g/L ~ 30g/L 接种量，采用无菌操作， 将种源细胞转接至 2L ~ 5L 玻璃瓶中 进行液体培养 。 培养过程 中 向培养液中通入无菌空气，空气流速为 0.75L/min ~ 1L/min ，培养周期 为 30 d ~ 45 d 。 6培育生产 6 .1 培养基配制 采用 MS 培养基 + 0.5 mg /L NAA + 1mg/L KT+20g/L 葡萄糖 + 5% 麦芽糖培养基 进行培养。 6 .2 培育操作 按 40g/L ~ 50g/L 接种量， 将种源细胞转接至 10L 玻璃瓶中。在培养过程中，将无菌空气通入培养 瓶中，空气流速为 0.75L/min ~ 1L/min ，培养周期 为 30 d ~ 45 d 。待嫩茎 生长总体积 至 培养瓶 总体积的 2/3 时，采收或留做下一阶段种源。 7 规模化生产 按 40 g/L ~ 50 g/L 接种量， 将采收的种源细胞转接至 5 0L ~ 1 00L 生物反应器中培养生产，其 它 按本 标准第 6 章的规定执行。 8 日常管理 一旦发现细菌或真菌的污染，立即将污 染品移出培育生产间并进行湿热高温灭菌。 9 采收 采收时剔除褐化植株，用过滤水缓慢冲洗嫩茎 3min~5min ， 300rpm/min 脱水离心 3min ，甩脱浮水 后可直接制备成铁皮石斛嫩茎鲜品，或 65 ℃ 烘干制备为干品。 10质量等级划分 铁皮石 斛 嫩茎 质量等级 划分要求 见表 1 。 表 1 铁皮石斛嫩茎 质量 等级划分 要求 等级 要 求 特一级 足干，形态规则， 长度 大于 6 mm ，嫩茎分枝 簇状 均一 排列， 翠绿色。 特级 足干，形态基本规则， 长度 在 3 ~ 6 mm ，嫩茎偶见小嫩叶，黄绿或翠绿色。  一级 足干，形态相似， 长度 在 1 ~ 3 mm ，嫩茎混有嫩叶，黄绿或翠绿色。 工业级 足干，形态相似， 长度 小于 1 mm ，嫩茎混有嫩叶，黄绿或翠绿色。 11 包装、运输、储存 11 .1 包装 分级后分别密封包装，包装上应标注品名、规格、产地、生产批号、合格标志。 11 . 2 运输 运输工具应清洁、卫生，无毒、无污染。运输时应防潮、防暴晒、防污染。 11 .3 贮存 贮存于阴凉、通风、清洁、干燥室内，不得与有毒、有害和有异味的物品同仓存放。